Stöchiometrische Versuche mit dem oxydierenden Gärungsferment 



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Ein derartiger Versuch ist in der Abbildung graphisch dargestellt. Wie man 

 sieht, wird bei Abwesenheit von Phosphat oder Arseniat der Aldehyd nicht oxy- 

 diert. Bei Gegenwart von Phosphat oder Arseniat wird der Aldehyd oxydiert, und 

 zwar nach dem einfachen Gesetz, das wir für die Kinetik aller derartiger Reak- 

 tionen gefunden haben 5 . 



= VQ 



de 

 ~d7 



co 



CO 



oder integriert: 



i'o 



c = co \ 1 — e 



wo vo die Anfangsgeschwindigkeit bedeutet, co die Gesamtkonzentration des Fer- 

 ments und c die Konzentration des zur Zeit t reduzierten Ferments. 



Bei dem Versuch war der Glycerinaldehyd gegenüber dem Pyridinnucleotid in 

 großem Überschuß, während von dem gebundenen Pyridinnucleotid nur einige y 

 pro cm 3 vorhanden waren. Wurde viel Pyridinnucleotid zugesetzt, z. B. 100 oder 

 1000 y pro cm 3 , so wurde der Aldehyd auch ohne Zusatz von Arseniat oder Phos- 

 phat oxydiert, weil dann kleine Verunreinigungen an Phosphat schon genügten, 

 um eine merkliche Reaktionsgeschwindigkeit zu erzeugen. 



Abb. 1. 1 mg oxydierendes Ferment pro cm 3 

 (Präparat von Böhringer und Söhne, Mann- 

 heim-Waldhof). 3 mg D-i-Glycerinaldehyd 

 pro cm 3 , der bei to zugesetzt wird. Lösungs- 



m 

 mittel: — -Triaethanolamin-HCl-Puffer, pH 



8,0. 20°. Lichtweg 1 cm. Wellenlänge 340 m/i. 

 Kurve I: Ohne Zusatz von Phosphat oder 

 Arseniat. Kurve II: 10~ J Mole Arseniat pro 

 cm 3 . Kurve III : 10~ 5 Mole Phosphat pro cm 3 . 



Z7,7<? 



I O.W 



öl 



• 1'rO 



cO.08 

 0,06 



o,ct 



0,02 



V 5 



Minuten - 



Der Versuch* entscheidet gegen Racker und zugunsten unsrer Auffassung, die 

 von vorneherein wahrscheinlich war, weil Glycerinaldehyd — ohne Protein — 

 durch Lösen in Phosphat oder Arseniat autoxy dabei 1 wird, während einen Ver- 

 such von entsprechendem Gewicht Racker zugunsten seiner Theorie nicht an- 

 führen konnte. Im Gegenteil, gibt man, ohne Protein, SH-Cystein zu Fischer- 

 Ester, so reagiert der Aldehyd in wäßriger Lösung schnell mit dem SH zu Thio- 

 acetal, aber der Aldehyd wird dabei nicht aktiviert, sondern /«aktiviert, worauf 

 wir bereits 1948, 4 Jahre vor Rackers Theorie, hingewiesen haben 6 . 



* Zusatz 1961. Diesem Versuch wird von P. D. Boyer (The Enzymes, Vol. 1, 

 Seite 579, New- York Academic Press 1959) entgegengehalten "that reduetion of 

 the D.P.N. bound to inactive enzyme depended on recycling of the active enzyme 

 which could oeeur by removal of the acyl group through reaction with inorganic 

 phosphate or arsenate." Bekanntlich kann man, mit einer hinreichenden Zahl unbe- 

 wiesener Hypothesen, alles was man wünscht, beweisen oder widerlegen. 



