D-( — )-Milchsäure in Chlorella 425 



trocknet wurde. Die Bestimmung der Drehung ergab: 9,2 mg Zinksalz pro cm 3 . Im 1-dcm-Rohr 

 ud = + 0,120°, also (cz)d = - 13°, während in der Literatur für die Drehung des D-milchsauren 

 Zinks - 10° bis + 12° angegeben wird. 



Zur Analyse wurde 2 Stdn. im Hochvakuum bei 60" getrocknet. Wir fanden: 



3,432 mg. 3,740 mg CO : . 1,271 mg H 2 0. 



1,132 mg Rückstand (ZnO). 

 3,513 mg. 3,894 mg C0 2 . 1,361 mg H 2 0. 



1,151 mg Rückstand (ZnO). 



Für (C 3 H 5 3 )2Zn 



Gef. C 29,7; 30,25 H 4,16; 4,35 Zn 26,50; 26,30. 



Ber. C 29,55 H 4,11 Zn 26,85. 



Es lag also fast reines D-milchsaures Zink vor. 



2. L-( - ^-Milchsäure aus Brenztraubensäure mit Milchsäur edehydrase aus Muskehl. Das gleiche 

 Präparat des hydrierten Pyridinnucleotids von Böhringer wurde verwendet, wie in Versuch 1. Die 

 Milchsäuredehydrase von Böhringer war kristallisiert und aus Muskeln hergestellt. 



Zu 50 cm :! /w/20-Natriumpyrophosphat pH 8,2 wurden 0,25 mMole brenztraubensaures Natrium 

 und 0,26 mMole Natriumsalz des Dihydro-diphosphopyridin-nucleotids gegeben. Die Reaktion 

 wurde durch Zugabe der Milchsäuredehydrase in Gang gesetzt. Ergab die optische Prüfung, daß 

 der größte Teil des Pyridinnucleotids reagiert hatte, so wurde mit Schwefelsäure auf 1/1-normal 

 angesäuert, 20 Stdn. mit Äther extrahiert, der Äther unter Zusatz von wenig Wasser verdampft 

 und die wäßrige Lösung mit Zinkcarbonat auf 65° erwärmt. Die spezifische Drehung des trockenen 

 Zinksalzes betrug [cc]d = 9,25°, [a]r> = - 10° bis -- 12° werden für das L-milchsaure Zink 



angegeben. 



Es lag also L-Milchsäure vor, während in Versuch 1 mit dem gleichen Pyridinnucleotid- 

 Präparat D-Milchsäure gebildet worden war. 



3. D-Milchsäure aus Chlorella nach Anaerobiose. 75 000 mm 3 Chlorella wurden in einer Salzlösung ge- 

 waschen und suspendiert, die 0,5",, MgSCM ■ 7 H 2 und 0,25",, KH.2PO4 enthielt und mit Schwefel- 

 säure auf pH 3,8 angesäuert war. In einem Volumen von 250 cm 3 wurden die Zellen 5 Stdn. anaerob 

 geschüttelt. Dann wurde 5 Min. auf 70° erhitzt, wobei die Milchsäure in die überstehende Flüssig- 

 keit austrat. Die Lösung wurde mit Schwefelsäure bis 1/1-normal angesäuert und 20 Stdn. aus- 

 geäthert. Nach Zusatz von wenig Wasser wurde der Äther verjagt. Die stark saure wäßrige Lösung 

 wurde mit Ammoniak alkalisch gemacht, auf Papier aufgetragen und mit Äthanol-Wasser-Ammoniak 

 (80 Vol.: 16 Vol.: 4 Vol.) zum Aufsteigen gebracht. Der Bezirk um Rj = 0,5 wurde eluiert, nach 

 Ansäuern mit Schwefelsäure ausgeäthert und mit Zinkcarbonat in das Zinksalz übergeführt. Aus- 

 beute 63 mg. 



Das Zinksalz war noch nicht rein, es enthielt zuviel Kohlenstoff, zu wenig Zink und die Rechts- 

 drehung war zu stark. Es wurde deshalb nochmals wie oben der Papierchromatographie unter- 

 worfen. Dann wurde nochmals ausgeäthert und das Zinksalz hergestellt. Die Bestimmung der 

 Drehung des trockenen Salzes, Zinksalzes, ergab : 



6,75 mg pro cm 3 . Im 1-dcm-Rohr u D = + 0,075°, 



also [a] D = + 11,1°, 

 12,85 mg pro cm 3 . Im 1-dcm-Rohr a D = + 0,125°, 

 also [u] D = + 9,8°. 

 während [u]d = 10° bis 12° für das D-milchsaure Zink angegeben werden. 



L-Apfelsäure aus Oxalessigsäure mit Chlorella-Extrakt. Oxalessigsäure ist diejenige Ketonsäure, die 

 nach unsern Erfahrungen in C/i/or<?//a-Extrakten durch hydriertes Pyridinnucleotid am schnellsten 

 hydriert wird. Brenztraubensäure wird etwa 20mal langsamer hydriert, a-Ketoglutarsäure wird 

 nicht hydriert. Es war von Interesse zu prüfen, ob die bei der Hydrierung der Oxalessigsäure ge- 

 bildete Äpfelsäure D- oder L-Äpfelsäure ist. 



Wir haben die gebildete Äpfelsäure nicht isoliert, sondern nur die Größe und Richtung ihrer 

 Drehung bestimmt und davon Gebrauch gemacht, daß bei Zusatz von Molybdänsäure die Äpfel- 

 säure die sehr hohe spezifische Drehung von etwa 1500° aufweist. Die Drehung des Pyridin- 

 nucleotids wird durch Molybdänsäure nicht gesteigert, so daß dessen Drehung ([«]d «* -- 30°) die 

 Bestimmung der Äpfelsäure nicht stört. 



