Isolierung der Hefezymohexase und ihre Kristallisation als Quecksilbersalz 223 



Man kann Adsorption an Al(OH)3 und Elution wiederholen, doch steigt dabei 

 im allgemeinen die Wirksamkeit W des Ferments nicht mehr wesentlich. 



Unter 0,77 gesättigtem Ammonsulfat bei 0° aufbewahrt, ist das Ferment haltbar. 



Kristallisation als Hg- Salz (alle Ammonsulfatlösungen sind in bezug auf NH3 

 w/100) 



100 mg Hefezymohexase werden aus dem 0,77 gesättigten Ammonsulfat abzen- 

 trifugiert. Auf den voluminösen Niederschlag gibt man bei 0° tropfenweise eine 

 mit Ammoniak neutralisierte ra/10-Lösung von Äthylendiamintetraessigsäure, bis 

 der Niederschlag gelöst ist. Man fällt aus dieser Lösung, die etwa 0,4 gesättigt be- 

 züglich Ammonsulfat ist, durch Zusatz von gesättigter Ammonsulfatlösung das 

 Ferment aus, zentrifugiert es hochtourig ab und wäscht den Niederschlag mit 

 0,77 gesättigter Ammonsulfatlösung, die in bezug auf Äthylendiamintetraessig- 

 säure m/500 ist. Der Niederschlag wird in möglichst wenig «/IOO-NH3 bei 0° 

 gelöst, 1 mg mit NH3 neutralisierte Äthylendiamintetraessigsäure werden auf 

 1 cm 3 zugegeben. Dann gibt man bei 0° gesättigtes Ammonsulfat tropfenweise bis 

 zur Trübung zu und läßt die Lösung im nicht evakuierten Exsiccator langsam 20° 

 warm werden, wobei das Ferment ausfällt. 



Der Fermentniederschlag, der nunmehr spezifisch so schwer ist, daß er von selbst 

 sedimentiert, wird abzentrifugiert und bei 0° tropfenweise mit n TOO-NH3 bis zur 

 Lösung versetzt. Dann gibt man zu 1 cm 3 etwa 0,1 cm 3 einer Quecksilbersalz- 

 lösung, die in ^gesättigtem Ammonsulfat, das in bezug auf NH3 w/10 ist, 3 mg 

 HgSÜ4 pro cm 3 enthält, und weiterhin gesättigtes Ammonsulfat bis zur schwachen 

 Trübung bei 0°. Läßt man dann die Flüssigkeit im nicht evakuierten Exsiccator 

 sich langsam auf Zimmertemperatur erwärmen, so scheidet sich das Hg-Salz der 

 Hefezymohexase in regelmäßigen Kristallen ab, die aus Abb. 1 ersichtlich sind. 



Die Prüfung des Quecksilbersalzes im optischen Test ergab : 0,00146 mg Protein 

 pro cm 3 erzeugten in 1 Min. bei 20°, bei 1 cm Schichtdicke, ein zlln io/i = 0,290, 



als0 J In 1'0/i 0,290 



W = — = =199 



c-Min. " 0,00146- 1 



Man beachte, daß man das Quecksilber zur Wirkungsprüfung nicht zu entfer- 

 nen braucht, da die Testlösung Cystein enthält. 



Literatur 



1 W.arburg, O., und Christian, W., Biochem. Z. 314 3 Kubowitz, F., und Ott, P.. Biochem. Z. 314 (1943), 94. 

 (1943), 149. Warburg, O., Wasserstoffübertragende 4 Wasserstoffübertragende Fermente, S. 39. 

 Fermente, Berlin 1948. 5 Wasserstoffübertragende Fermente, S. 49. 



2 Warburg, O., und Christian, W., Biochem. Z. 310 

 (1941), 384. 



