Über das Verhalten von Aswites-Krebszellen zu Zymohexase 225 



ragend für quantitative Versuche. Resistent beim Zentrifugieren und beim Schüt- 

 teln in Manometergefäßen, sind sie histologisch reiner als Tumorgewebe. Sie sind 

 das erste Material, mit dem der Stoffwechsel der Tumorzellen quantitativ be- 

 stimmt werden konnte, und sie liefern, wie es sein muß, wesentlich höhere Q- 

 Werte als die früher untersuchten Tumorgewebe (die alle Mischgewebe waren) — 

 nämlich anaerob etwa 50 und aerob etwa 30 — für in Ascites-Serum suspendierte 

 Zellen.* Hält man bei derartigen Versuchen, die wegen der großen Gärung der 

 Ascites-Zellen mit sehr verdünntem Ascites ausgeführt werden müssen, Kohlen- 

 säuredruck, Bicarbonat und Zucker konstant, so sinkt der Stoffwechsel im Ver- 

 lauf von stundenlangen manometrischen Versuchen nur wenig ab. 



Bei Versuchen mit diesen Zellen wurde früher, in einer Arbeit mit Hiepler 5 , 

 gefunden, daß sie Zymohexase an das umgebende Ascites-Serum abgeben, wenn 

 sie bei 38° ohne Zusatz von Zucker, gehalten werden. Es wurde ferner gefunden, 

 daß die Abgabe von Zymohexase anaerob wesentlich größer ist als aerob, Ergebnisse, 

 die in einer interessanten Arbeit von Schade 6 erweitert worden sind. 



Im folgenden berichten wir über Versuche, bei denen Zucker zu den Ascites- 

 Zellen zugesetzt wurde, bei denen also das Verhalten von Zymohexase zu gärenden 

 Ascites-Zellen untersucht wurde. Den Impftumor verdanken wir Dr. Georg 

 Klein, Stockholm. 



Entwicklung der Versuchstechnik 



Unverdünnter Ascites gärt so stark, daß bei 38° nach einigen Minuten Zucker und 

 Bicarbonat verbraucht sind. In unseren früheren Versuchen über die Abgabe der 

 Zymohexase, in denen der Ascites unverdünnt war, konnte deshalb nicht bei 

 Gegenwart von Zucker gearbeitet werden. Verdünnt man andererseits den Ascites 

 zu sehr, so kann man keine wesentlichen Effekte erwarten, da die Fermentabgabe 

 in einem stöchiometrischen Verhältnis zur Zellmenge steht. Wir wählten unter 

 diesen Umständen einen Mittelweg und verdünnten den Ascites nicht, wie bei den 

 Messungen der Gärung, auf das lOOfache, sondern nur auf etwa das 8fache. 

 Zucker und Bicarbonat wurden dann unter manometrischer Kontrolle ihres Ver- 

 brauchs halb- oder ganzstündlich ersetzt, und zu große Verschiebungen des pH 

 nach der sauren Seite wurden vermieden. So konnte das Verhalten der Krebszellen 

 zu Zymohexase auch bei Gegenwart von Zucker, während der Gärung, untersucht 

 werden. 



Eine zweite Schwierigkeit betraf die Gerinnungshemmung. Ersatz des Serums 

 durch Ringerlösung oder durch eine andere Salzlösung kam nicht in Frage. 

 Andererseits zeigte sich, daß alle gerinnungshemmenden Mittel, auch Heparin, 

 die Effekte verminderten. Folgendes Verfahren bewährte sich unter diesen Um- 

 ständen: Wir entnahmen den Ascites unter Zusatz einer sehr kleinen Menge 

 Heparin, zentrifugierten und verwarfen das überstehende Serum, das die Haupt- 

 menge des Heparins enthielt. Zur Resuspension der Zellen diente dann ein anderes 

 Ascites-Serum, das ohne Heparin entnommen, nach der Entnahme sofort zentri- 

 fugiert, dann 10 Minuten auf 57° erhitzt und schließlich klar zentrifugiert werden 



* Zusatz 1961. Vergleiche aber Beitrag Nr. 17 dieses Buchs. 



15 Warburg, Zellphysiologie 



