Über das Verhalten von Ascites-Krebszellen zu Zymohexase 227 



366 m// gemessen, weil 366 m/u leicht aus der Quecksilberlampe zu isolieren ist. 

 Akuo/i für 366 m// wurde dann durch Multiplikation mit dem Faktor 1,95 auf 

 340 mit umgerechnet. 



Zweitens wurde in der Testlösung das Glykokoll durch Thioharnstoff ersetzt. 

 Die Testlösung hatte dann die Zusammensetzung : 



3,70 cm 3 Wasser, 



0,5 cm 3 8-proz. Thioharnstofflösung, 

 0,25 cm 3 DPN-Lösung (6 mg/cm 3 ), 



0,1 cm 3 Lösung des oxydierenden Ferments (4,35 mg/cm 3 ), 

 0,2 cm 3 5,4-proz. Na-Arseniat, 

 0,05 cm 3 Ascites-Serum, 

 bei t : 0,2 cm 3 m/10-hexosediphosphorsaures K, pH 7,4. 

 Summe: 5,0 cm 3 . 



Sibley und Lehninger- haben auf die Möglichkeit hingewiesen, daß bei op- 

 tischen Testen Organextrakte das DPN so schnell zerstören, daß keine Licht- 

 schwächung in den Testen entsteht, auch wenn Zymohexase vorhanden ist. Ins- 

 besondere für Leberextrakte solle dieser Einwand ernstlich in Betracht kommen. 

 In Serum haben wir nie DPN-Zerstörung beobachtet. Auch der Muskelsaft, 

 der im Ascites-Serum auf das 14000fache verdünnt ist, zerstört DPN nicht 

 merklich. Zur Sicherheit aber prüfe man jedes neue System auf DPN-Zer- 

 störung, indem man gleiche Mengen kristallisierter Zymohexase zu der Test- 

 lösung mit und ohne Organsaft zusetzt. Dann muß man in beiden Fällen gleiche 

 Endwerte der Lichtschwächung erhalten. 



Versuchsanordnung 



Zu inaktiviertem Ascites-Serum wurde so viel an Zellen und Substanzen zu- 

 gegeben, daß nach den Zusätzen 1 cm 3 enthielt: 



35 mm 3 Ascites-Zellen, 

 3 mg Glucose, 

 3 /Muskelzymohexase, 

 500 mm 3 in Bicarbonat gebundene Kohlensäure (wobei der Bicar- 

 bonatgehalt des inaktivierten Ascites-Serums vorher manome- 

 trisch bestimmt werden mußte). 



Die Gesamtmenge der Mischung betrug im allgemeinen 5 cm 3 . 1 cm 3 davon 

 wurde zentrifugiert, das abgehobene Serum diente zur Bestimmung der Zymo- 

 hexase zur Zeit Null und wurde zunächst im Eisschrank aufbewahrt. 3 cm 3 wur- 

 den in den Hauptraum eines kegelförmigen Manometrie-Gefäßes gegeben (Vo- 

 lumen etwa 17 cm 3 ), dessen Gasraum 5 Vol.-Proz. C0 2 in 2 oder N> oder Argon 

 enthielt. Nachdem das Gefäß 2 Stunden bei 38° bewegt worden war, wurde 1 cm 3 

 entnommen, zentrifugiert und das überstehende Serum bei 0° aufbewahrt. Der 

 Rest wurde nach Maßgabe des manometrisch beobachteten Verbrauchs mit Zucker 

 und Bicarbonat versetzt und weiter bei 38° bewegt. Nach weiteren 2 Stunden 

 wurde wieder 1 cm 3 entnommen, zentrifugiert und das überstehende Serum ab- 

 gehoben. Schließlich wurde in den 3 Serumproben — der Zeit Null und den Zeiten 

 2 und 4 Stunden — die Zymohexase nach geeigneter Verdünnung mit der optischen 

 Methode bestimmt. 



