506 Über die Entstehung des Krebsstoffwechsels in der Gewebekultur 



wickelt worden und wird von Frau Dr. Grützner folgendermaßen beschrieben 5 : 

 „Die Gewebefragmente werden durch Vorbehandlung mit einer 0,25proz.Trypsin- 

 lösung in Einzelzellen zerlegt, die dann im flüssigen Nährmedium aufgeschwemmt 

 und in Flaschen einpipettiert werden. Sie nehmen Kontakt mit der Glaswand und 

 bilden auf dieser durch Vermehrung eine dichte Membran, die nach Behandlung 

 mit Versenlösung (0,02%) sich in eine Zellsuspension auflöst und als solche nach 

 Fortwaschen des Versens in neue Gefäße übertragen wird („Subkultur"), um hier 

 wieder zu einer gleichmäßigen Membran auszuwachsen. Versen hat sich als ober- 

 flächenentspannendes Mittel zur Auflösung von Zellmembranen in Einzelzellen 

 gut bewährt." 



Als Züchtungsgefäße verwendeten wir Flaschen nach Roux von 1200 cm 3 In- 

 halt, in die die Impfzellen, suspendiert in 70 cm 3 Nährlösung, gegeben wurden. 

 Die Nährlösung war Hanksche Salzlösung 6 , der pro /lg Glucose, 5 g Lactalbu- 

 min-Hydrolysat der Firma Nordwald-Hamburg, 1 g Hefeextrakt der Firma Nord- 

 wald-Hamburg, 1,0 g Natriumbicarbonat und 20 cm 3 inaktiviertes Kälberserum 

 zugesetzt worden waren. Der Gasraum der Züchtungsgefäße enthielt 5 Vol.-% 

 CO-2 und 95 Vol.-",, Luft. Die Züchtungsgefäße wurden im Brutschrank nicht be- 

 wegt. 



2. Messung des Stoffwechsels 



Der Stoffwechsel der Nierenzellen wurde manometrisch mit der 2-Gefäßmethode, 

 wie kürzlich beschrieben 7 , gemessen. Die Zellen wurden zu dem Zweck mit Salz- 

 Lösung, der 0,02' ',, Versen zugesetzt war, vom Glas abgelöst und in Einzelzellen 

 zerteilt, dann auf der Zentrifuge bei 650 g zentrifugiert, in Züchtungsmedium 

 (vgl. vorigen Abschnitt) oder in inaktiviertem Mäuse-Asciteskrebsserum suspen- 

 diert und in die Manometriegefäße pipettiert. L-(+)-Milchsäure wurde für die 

 Zwecke der Manometrie dem Züchtungsmedium (2 mg pro cm 3 ) zugesetzt, wäh- 

 rend ein Zusatz von Milchsäure zu Ascitesserum, wegen des Eigengehalts an Milch- 

 säure, nicht notwendig war. Zuerst wurde immer der aerobe Stoffwechsel ge- 

 messen. Dann wurde 5 Vol.-% CO>-Luft durch 5 Vol.-% CO-2-Argon ersetzt, und 

 es wurde der anaerobe Stoffwechsel gemessen. 



Die Temperatur bei der Messung war 37°. Die Volumina des Gefäßpaares 

 waren 16,10 cm 3 und 23,34 cm 3 , das Volumen der eingefüllten Flüssigkeit betrug 

 7,15 cm 3 . Bei diesen Abmessungen erzeugen alle normalen Zellen, wachsende oder 

 nicht wachsende, außer der Retina, in beiden Gefäßen negative Drucke, während 

 die Krebszellen in beiden Gefäßen positive Drucke erzeugen 7 . 



Negative Drucke in beiden Gefäßen erzeugen auch die normalen Leukocyten des Blutes, von 

 denen noch immer in der Literatur behauptet wird, daß sie „Krebsstoffwechsel" haben. Wir ver- 

 hindern die Gerinnung des Blutes mit Na3-Citrat, zentrifugieren die roten Blutzellen vorsichtig 

 heraus und bringen dann die Suspension der weißen Zellen, ohne sie zu zentrifugieren, in das Paar 

 der Manometriegefäße. Vogelblut ist besonders geeignet, da hier die Schwierigkeit der Abtren- 

 nung der Thrombocyten fortfällt. Die veralteten Methoden, die Zellen in „Krebs-Ringer" zu 

 suspendieren und bei der Manometrie Kalilauge im Einsatz zu verwenden (vgl. F. Seelich, Z. f. 

 Krebsforschung 62 [1952] l)sind gänzlich zu vermeiden, da man hierbei den Stoffwechsel bei dem 

 Kohlensäuredruck Null, also bei unphysiologischen Bedingungen, mißt. 



