68 Manometrische Bestimmung der Ascorbinsäure* 

 Von Otto Warburg und Günther Krippahl 



Löst man im Hauptraum eines Manometriegefäßes einige Mikromole Na-Ascorbat 

 in 3 ccm n 100 oder n/10 Bikarbonat, sättigt mit 20 Vol.-",, COo-Argon, so daß 

 pH 6,5 oder 7,5 wird, und gibt dann aus der Ansatzbirne überschüssiges Chinon 

 in den Hauptraum, so wird bei 20° in wenigen Minuten 1 Mol CO2 pro Mol 

 Ascorbat aufgenommen infolge der Reaktion : 



CO \ CO 



O -h Chinon - H2O = 



CH.OH 



CO 



CO 



CH 



CHOH 



CH>OH 



\ 



O -f- Hydrochinon — NaOH 



Auf die Oxydation des Ascorbats folgt eine langsamere Reaktion, die Auf- 

 spaltung des Dehydrolactons zur 2,3-Diketolactonsäure, und es wird 1 Mol CO2 

 pro Mol Ascorbat in den Gasraum zurückentwickelt. Diese manometrischen 

 Reaktionen sind in ihrer Folge so spezifisch für Ascorbinsäure, daß eine Verwechs- 

 lung mit andern Substanzen kaum möglich erscheint. Die Methode ist von uns mit 

 gutem Erfolg auf Pflanzensäfte und Grana angewandt worden. Mengen von einem 

 halben Mikromol Ascorbinsäure können mit ihr schnell und genau bestimmt wer- 

 den. Zum Beispiel fanden wir : 



1. Bei pH 7, . Im Hauptraum eines Manometriegefäßes 3 ccm n/10 NaHCOß 

 + 12 Mikromole Na-Ascorbat (Merck), in der Ansatzbirne 20 Mikromole Benzo- 

 chinon, aus Petroläther umkristallisiert, im Gasraum 20 Vol.-",, CO-2-Argon, so 

 daß pH etwa 7,5 war. Wurde das Chinon bei 20° in den Hauptraum gegeben, so 

 waren nach einigen Minuten 263 cmm =11,8 Mikromole CO2 aufgenommen und 

 nach 265 Minuten, mit einer Halbwertszeit von 50 Minuten, 266 cmm =11,8 cmm 

 CO2 zurückentwickelt. 



2. Bei pH 6,5. Im Hauptraum 3 ccm n/100 NaHC0 3 - 5 Mikromole Na- 

 Ascorbat, in der Ansatzbirne 20 Mikromole Chinon, im Gasraum 20 Vol.-% CO2 

 -Argon, so daß pH etwa 6,5 war. Wurde das Chinon bei 20" in den Hauptraum ge- 

 geben, so waren in 2 1 jo Minuten 108 cmm = 4,82 Mikromole CO2 aufgenommen. 

 Die Rückentwicklung der CO2 verlief hier, wegen pH 6,5, viel langsamer als in (1) 

 und betrug nach 30 Minuten nur etwa 5° der vorher aufgenommenen CO2. 



Je nachdem man also die Rückentwicklung der CO2 zur Kontrolle zu sehen 

 wünscht oder nicht, wird man bei pH 7,5 oder 6,5 arbeiten. 



Es ist hervorzuheben, daß Chinon hier als Oxydans besonders geeignet ist, da 

 Hydrochinon bei pH 6,5 und 7,5 keine CO2 aus Bikarbonat austreibt. 



* Nicht an anderer Stelle erschienen. 



