594 Über die Wirkung der Röntgenstrahlen auf den Stoffwechsel von Milchsäurebakterien 



III. Experimenteller Teil 



1. Züchtimg der Bakterien 



Als Kulturmedium für Laktobazillus Delbrückii wurde eine Nährlösung folgender Zusammen- 

 setzung verwendet: 



1000 ml Malzmaische mit 10% Zuckergehalt 

 5 ml Hefeautolysat (aus Preßhefe) 

 10 g Pepton (aus Casein, tryptisch verdaut) 

 10 g Glucose 

 5 g Lactose 

 20 g Kreide (CaCOa, pulverisiert) 

 Der Bakterienstamm wurde als Stichkultur in Difco „Micro Assay Culture Agar" gehalten und 

 immer neu auf Nährlösung übergeimpft, die sich in Portionen zu 40 ml in 250 ml Erlenmeyer- 

 kolben befand. Nach Stehenlassen der angeimpften Nährlösung bei 38° für 48 bis 55 Stunden 

 wurden die Bakterien durch fraktioniertes Zentrifugieren daraus gewonnen. 



Bakterium lactis aerogenes wurde als Oberflächenkultur auf Difco „Micro Assay Culture Agar" 

 gezüchtet, mit der Platinschlinge vorsichtig abgehoben und direkt zum Versuch suspendiert. Die 

 Züchtung erfolgte bei 38° über 15 bis 20 Stunden. 



2. Bestimmung des Wasserstoffperoxyds 



Nach Aebi 2 kann das in bestrahlten Lösungen gebildete Wasserstoffperoxyd durch Zugabe von 

 o-Dianisidin und Peroxydase bestimmt werden. Die Peroxydase überträgt das H2O2 auf das 

 o-Dianisidin und bildet so einen braungelben Farbstoff, dessen Absorption bei 436 m;x gemessen 

 werden kann. 4 ml bestrahlte Phosphatlösung, die in bezug auf Versen m/ 10 000 war, wurden mit 

 4 ml o-Dianisidin-Lösung versetzt und kurz nacheinander die dem Versen äquivalente Menge 

 Ferri-Nitrat und 0,1 ml Peroxydase-Lösung zugegeben. Nach kräftigem Umschütteln wurde inner- 

 halb von 10 Minuten die Absorption gegen eine mit unbestrahlter Phosphatlösung bereitete Probe 

 gemessen. Eisensalz wurde zugegeben, um das Versen, das die Peroxydase hemmen würde, zu 

 binden. Die Peroxydase-Lösung bestand aus 5 mg Peroxydase II von Boehringer in 1 ml dest. 

 Wasser. Zur Herstellung der o-Dianisidin-Lösung gibt man 10 mg o-Dianisidin (Eastman), ge- 

 löst in 2 ml Aceton, zu 150 ml m/ 15 Phosphatpuffer, pH == 7,0. Die HoO^-Konzentration berechnet 

 sich aus der gemessenen Absorption nach der Gleichung 



1 Io 

 In 



CH2O2 = - = |J.Mol/cm 3 , 



d • ß 



wobei d den Lichtweg in cm bedeutet und ß den Absorptionskoeffizienten, der bei 436 m// 

 = 18,5 cm 2 /ijiMol gefunden wurde. 



Literatur 



1 Warburg, O., Schröder, W., Gewitz, H.-S., und 2 Aebi, H., und Mitarbeiter, Helv. Chim. Acta 42 (1959), 

 Völker, W., Z. f. Naturforschg. 13b (1958), 591. 2531. 



