Katalasegehalt, Gärung und Atmung in der Zellkultur 



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setzen müssen, um Kontakt mit der Glaswand aufnehmen zu können. Wegen der Nicht-Bewegung 

 der Zuchtkolben waren die Gasdrucke in den Zellen nicht so gut definiert wie bei der Manometrie. 



Das beste Wachstum erhielten wir, wenn die Kolben in den ersten zwei Tagen mit 5% CO2- 

 Luft und dann mit 5",, CO-2-Argon gefüllt waren. Das Nährmedium wurde gewechselt, wenn der 

 Phenolrot-Indikator nach gelb umschlug. 



Zur Bestimmung des Stoffwechsels und der Katalase wurden die Zellen mit Versen von der 

 Glaswand in folgender Weise abgelöst. Das Nährmedium wurde abgegossen und die am Glas 

 haftende Schicht von Zellen zweimal mit einer Salzlösung 



(8,0 g NaCl, 

 0,2 g KCl, 



1,15g NaiHPOr 2 H2O, 

 0,2 g KH2PO4, 

 mit bidest. Wasser auf 1 Liter) 



gewaschen. Die Zellen wurden dann mit einer Lösung von 0,02% Versen in obiger Salzlösung 

 bei 35° abgelöst, aus dieser Zellsuspension abzentrifugiert (20 Min. bei 100 g) und für die Stoff- 

 wechselbestimmung mit inaktiviertem Mäuseascites-Serum und für die Katalasebestimmung mit 

 Ringer-Bicarbonat aufgenommen. 



Bestimmung der Katalase 



Zur manometrischen Katalasebestimmung wurden in den Hauptraum eines Mano- 

 metriegefäßes 3 cm 3 Zellsuspension (in Ringer-Bicarbonat) und in die Birne 

 10 //Mole H2O2 gegeben. Der Gasraum enthielt 5 Vol.-% CO-2-Luft, pH war 7,4, 

 die Temperatur 38°. Durch Einkippen des H2O2 in den Hauptraum wurde der 

 Sauerstoff aus dem H2O2 entwickelt. Aus dem linearen Teil der Kurve (Abb. 2) 

 wurde dann die Anfangsgeschwindigkeit v == mm 3 (^/Minuten berechnet und 

 durch das Trockengewicht der Zellen in mg dividiert. Man erhält so den relativen 

 Katalasegehalt der Zellen 



Q Katalase - 



mg Trockengewicht 



Die bei der Trypsinisierung zuerst abgegossenen frischen Nierenzellen enthalten 

 noch rote Blutzellen, dagegen sind die später abgegossenen Zellen hinreichend frei 

 von roten Blutzellen. Im übrigen fanden wir für die roten Blutzellen junger Ka- 



Abb. 2. Katalase in frisch trypsinisierten Nie- 

 renzellen. Bei tu 10 //Mole H2O2 in 3 cm 3 

 Zellsuspension eingekippt. (Ringer-Bicarbo- 

 nat, Gasraum: 5% CC>2-Luft, 38°). Trocken- 

 gewicht der Zellen = 0,03 mg. vo == 7,7 mm 3 

 O2 pro Minute. QKat = 257 



I 



110 

 WO 



^90 



P° 

 70 



60 



50 



10 



30 



20 



10 



2 ¥ 6 8 10 15 20 



30 V0 50 



Minuten — > 



ninchen einen Katalasewert O kal == 130, aber für die frischen Nierenzellen einen 

 im Mittel 3mal höheren Katalasewert, so daß es ausgeschlossen ist, daß der hohe 

 Katalasewert der frischen Nierenzellen von der Katalase beigemengter Blutzellen 



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