4] ARTSPEZIFITÄT DER PROTEINE 69 



zunutze machen und beim Abbau des Cytochroms-c die gefärbte pros- 

 thetische Gruppe als Markierung des ihr benachbarten Teiles des Apopro- 

 teins verwenden. Bei einem Studium der Artunterschiede in Cytochrom-c 

 verschiedener Herkunft bietet die Untersuchung gerade des porphyrinnahen 

 Teiles ihrer Aproproteine noch einen weiteren Vorteil; sie gibt absolute 

 Sicherheit, dass in den homologen Molekülen analoge Regionen vergUchen 

 werden, die in der gleichen sterischen und funktionellen Beziehung zur 

 prosthetischen Gruppe stehen. 



Wenn Cytochrom-c mit verdünnter Schwefelsäure schonend hydrolysiert 

 wird, so geht der Abbau nicht bis zum Porphyrin-c, sondern es finden sich 

 im Hydrolysat auch Peptide des Porphyrins-c, Verbindungen also, in denen 

 mit den porphyrin-gebundenen Cysteinresten noch andere Aminosäuren 

 verknüpft sind. Diese gefärbten Produkte lassen sich von den im Hydro- 

 lysat vorkommenden freien Aminosäuren und porphyrinfreien Peptiden 

 durch Adsorption an Talk abtrennen. Unterwirft man Porphyrin-c und 

 Porphyrin-c-Peptide der Silbersulfat-Behandlung, welche Paul (1950) mit 

 Erfolg zur Spaltung des intakten Cytochroms-c in Hämatoporphyrin und 

 Apoprotein verwendet hat, so werden unter Sprengung der Thioätherbrücken 

 Cystein und Cysteinpeptide in Freiheit gesetzt. Oxydation mit Perameisen- 

 säure verwandelt diese in Cysteinsäure und Cysteinsäurepeptide, welche 

 durch lonophorese und Papierchromatographie voneinander getrennt werden 

 können. (Tuppy und Bodo, 1954 a). Die bei der Untersuchung von Rinder- 

 Cytochrom-c erhaltenen und identifizierten Cysteinsäurepeptide zeigten (siehe 

 Tabelle 1, Teil A), dass einer der beiden Cysteinreste des Porphyrins-c von 

 Lysin und Alanin, der andere von Glutaminsäure und Histidin flankiert ist 

 (Tuppy und Bodo, 1954 c). 



Ein weiterer Einblick in die der prosthetischen Gruppe benachbarte 

 Region des Apoproteins wurde durch einen enzymatischen Abbau des 

 Cytochroms-c gewonnen (Tuppy und Paléus, 1955). Bei der Verdauung des 

 Hämopro teins mit Pepsin entsteht, wie Tsou schon 1951 gezeigt hat, ein 

 niedrigermolekulares Abbauprodukt, welches rot gefärbt ist und die intakte 

 prosthetische Gruppe des Ferments enthält. Tsou's 'pepsinmodifiziertes 

 Cytochrom-c' war jedoch nicht einheitlich; es bedurfte noch einer Reihe 

 von Reinigungsoperationen (Fällungen mit Ammonsulfat und Trichlores- 

 sigsäure, Ausflockung beim isoelektrischen Punkt und Verteilungschromato- 

 graphie auf Hyflo-Supercel-Säulen), bis ein wirklich reines Produkt vorlag. 

 Dieses 'Hämopeptid' enthielt, wie eine Aminosäureanalyse nach Stein und 

 Moore ergab, abgesehen von den zwei prophyrin-gebundenen Cysteinresten, 

 je einen Threonin-, Alanin-, Histidin- und Lysin-Rest, zwei Valin- und drei 

 Glutaminsäure-Reste, insgesamt also 1 1 Aminosäurebausteine. Diese sind in 

 einer einzigen Polypeptidkette angeordnet, an deren Aminoende, wie mit 

 der DNP-Technik (Sanger, 1945) festgestellt wurde, ein Valinrest sitzt, ge- 

 folgt von Glutaminsäure. Vom Aminoende stammt auch ein Tripeptid, Val- 

 Glu(NH2)-Lys, welches vom Hämopeptid bei Inkubation mit Trypsin 



