8 



Quantitative Papierchromatographie der 

 Aminosäuren durch Isotopenverdünnung 



F. TURBA 



Physiologisch-chemisches Institut der Universität München 



Eine Verbindung mit 'anormalem' Isotopengehalt wird durch die üblichen 

 physikalisch-chemischen Methoden des Laboratoriums nicht von ihrem 'nor- 

 malen' Analogen getrennt (Hevesy^). Setzt man z.B. einem Proteinhydrolysat 

 mit einem bestimmten Gehalt an Glutaminsäure eine definierte Menge W^- 

 Glutaminsäure zu, so läßt sich aus der eingetretenen 'Verdünnung' des 

 Isotops auch in einer nicht quantitativ isolierten, aber reinen Probe der 

 Glutaminsäuregehalt des Hydrolysats berechnen ('Isotopenverdünnungs- 

 methode' nach Rittenberg^). Man kann die zu bestimmende Verbindung 

 auch mit einem isotop markierten Rest substituieren und einen Überschuß 

 des unmarkierten Derivats zusetzen ('Isotopenderivatmethode' nach Keston, 

 Udenfriend u. Mitarbeitern.^'^ '^ Wir haben Versuche unternommen, das 

 Isotopenverdünnungsverfahren an C^^-markierten Aminosäuren mit der 

 Papierchromatographie zu kombinieren, um diese Methode dadurch quanti- 

 tativ zu gestalten,^ 



BESCHREIBUNG DER METHODE 



0,5-1,0 mg Protein werden in 5 ml glasdestilherter, 20%iger Salzsäure in 

 einem Reagensglas (mit Schliff) gelöst und die C^^-Analogen der zu bestim- 

 menden Aminosäuren in solcher spezifischer Aktivität zugesetzt, daß das 

 Mengenverhältnis inaktive: aktiver Aminosäure etwa 10:1 und die meßbare 

 Aktivität etwa 1000-4000 Impulse/min beträgt. Man verschUeßt die Gläser 

 mit Schhff"stopfen und hydrolysiert mindestens 24 Stunden bei 110° im 

 Aluminiumblock. Danach werden die Reagensgläser direkt an einen Rota- 

 tionsverdampfer angeschlossen, die Lösung im Vakuum mehrmals zur 

 Trockne gebracht und genau neutralisiert. Die 2-dimensionale Papier- 

 chromatographie erfolgt wie üblich (z.B.: 1. Dimension: sec.-Butanol/ Amei- 

 sensäure/Wasser 70 : 15 : 15; 2. Dimension: Methyläthylketon/Pyridin/ 

 Wasser 70 : 15 : 15).' Man lokahsiert die zu bestimmenden Aminosäuren 

 im Chromatogramm durch Radio-autographie (24-48 Std. Aufpressen auf 



