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Tab. 2 zeigt das Verhalten von Methionin bei Erhitzen in Gegenwart von 

 Glucose mit 20% HCl. Setzt man C^^-markiertes Methionin vor der 'Hydro- 

 lyse' zu, so findet man die Aminosäure quantitativ wieder, da die Zerstörung 

 das inaktive wie das aktive Methionin gleichermaßen betrifft. Bei Zusatz 

 nach 'Hydrolyse' dagegen sind nur 36,2%, nach der Elution aus dem Chroma- 

 togramm nur noch 18,5% bestimmbar (zu Verlusten beim Chromato- 

 graphieren in versch. Lösungsmitteln, bes. Phenol, Trocknen bei versch. 

 Temperaturen, durch Lichteinwirkung usw. vgL^^-^^) 



Auch in normalen Hydrolysaten erfassen wir nur 40-60% der eingesetzten 

 Mengen bei der Konzentrationsbestimraung am Schluß des Analysenwegs 

 in Substanz (vgl. Tab. 1). 



Die zur Kompensation der bei der Papierchromatographie eintretenden 

 Verluste von Fischer u. Dörfel" vorgeschlagene Methode, zu jeder Analysen- 

 probe ein auch quantitativ möglichst identisches künstliches Aminosäure- 

 gemisch unter genau gleichen Bedingungen mitzuanalysieren und die Ana- 

 lysenwerte auf seine Ausbeuten zu beziehen, ist wegen der notwendigen 

 Vorversuche langwierig und weniger genau als die Isotopenverdünnung. Ein 

 weiterer wesentlicher Vorteil des hier beschriebenen Verfahrens besteht in 

 der genauen und verlustlosen Markierung der Lage der Aminosäuren im 

 Chromatogramm durch Radioautographie. Diese Tatsache ermöglicht die 

 Anwendung der wirksameren 2-dimensionalen Papierchromatographie ohne 

 teilweises Zerstören der Aminosäuren durch Besprühen mit farbbildenden 

 Reagentien,^^-" Erzeugung von Fluoreszenz durch Erhitzen-" usw. Auch 

 gelingt die Trennung aller Aminosäuren im gleichen Chromatogramm, wäh- 

 rend beim eindimensionalen Verfahren stets mehrere Versuche mit ver- 

 schiedenen Lösungsmitteln notwendig sind (McFarren). Schliesslich verdient 

 die quantitative Bestimmung in Lösung nach Elution den Vorzug vor der 

 Kolorimetrie im Papier z.B. nach Besprühen mit Ninhydrin.^^ 



Vor den beschriebenen Isotopenderivatmethoden (mit J^^^ und S^^-p- 

 Jodphenylsulfonyl-Aminosäuren) hat das entwickelte Verfahren den Vorteil 

 besserer Trennungen bei der Papierchromatographie und der dauernden 

 Verwendbarkeit der markierten Substanzen infolge der hohen Halbwertszeit 

 von C^*, vor den N^^- Verfahren der einfacheren Messung des radioaktiven 

 Isotops und der Benutzung kleinerer Mengen, wie sie die Papierchromato- 

 graphie erfordert. 



Die einzig ausschlaggebende Fehlerquelle des Verfahrens ist die Verun- 

 reinigung der Analysensubstanz mit Ninhydrin-positivem Material, das die 

 Ergebnisse fälschen würde. Da jedes Chromatographiepapier auch nach 

 Auswaschen noch geringe Mengen Verunreinigungen enthält, die mit Nin- 

 hydrin reagieren (vgl. Abb. 4), ist es notwendig, von den Analysenwerten 

 entsprechende kleine Korrekturen in Abzug zu bringen. Die Benutzung von 

 reinem Glasfaserpapier zur Chromatographie, das frei von diesem Fehler 

 ist, setzt das Imprägnieren mit Puffersalzen voraus; die C-^'*Messung kann 

 danach nur noch als C^^Og erfolgen. Das Gleiche gilt für die Anwendung 



