10] PROTEOLYSE DU CHYMOTRYPSINOGÈNE 159 



résidu d'alanine, lequel se trouve justement en position N-terminale dans la 

 chymotrypsine-a (tableau 1). Une telle coincidence n'est vraisemblablement 

 pas fortuite. Aussi, avons-nous cherché à mieux caractériser les protéines 

 résultant de l'attaque chymotrypsique du chymotrypsinogène. En utilisant 

 les techniques classiques, nous avons réussi à cristalliser deux de ces pro- 

 téines, l'une contenant la threonine N-terminale et l'autre, l'alanine. Nous 

 avons également démontré la formation effective de la protéine contenant 

 l'alanine et la serine (voir fig. 1) N-terminales. Ces protéines n'ont pas été 

 obtenues à l'état pur car la cristaUisation ne possède pas ici une efficacité 

 bien considerable.* Mais les protéines en question ont été malgré tout pré- 

 parées dans un état suffisamment défini pour permettre la réalisation de 

 quelques expériences significatives. 



Ces protéines sont inactives. Nous ne nous en étonnerons pas car le chymo- 

 trypsinogène n'est pas activé par la chymotrypsine et nous savons déjà que 

 l'on active pas ce zymogène en rompant n'importe quelle liaison. Mais elles 

 sont encore activables par la trypsine et nous les avons pour cette raison 

 appelées 'néochymotrypsinogènes'. Cette activation est identique sur le plan 

 chimique à celle du chymotrypsinogène ordinaire. Elle s'effectue grâce à 

 l'ouverture de la même liaison arginyl-isoleucine. Mais sa vitesse et ses 

 résultats sont bien différents. La fig. 3 permet d'étudier l'apparition de 

 l'activité chymotrypsique quand on active dans les mêmes conditions le 

 chymotrypsinogène (courbe de gauche) et le néochymotrypsinogène à threo- 

 nine N-terminale (courbe de droite). 



Deux remarques peuvent être faites à propos des courbes de la fig. 3. 

 D'une part, l'activation du néochymotrypsinogène est nettement plus lente 

 que celle du chymotrypsinogène. On sait que la liaison arginyl-isoleucine 

 manifeste au sein du chymotrypsinogène une vulnérabilité vraiment extra- 

 ordinaire vis-à-vis de la trypsine puiqu'elle est coupée dans toutes les molé- 

 cules après quelques minutes à 0°C. Cette vulnérabilité est certainement due 

 à un élément particulier de structure que le chymotrypsinogène possède à 

 un très haut degré. L'élément en question est loin de disparaître au moment 

 des ruptures chymotrypsiques. Mais il est atténué de façon sensible. D'autre 

 part, l'activité potentielle du néochymotrypsinogène, c'est à dire l'activité 

 chymotrypsique maximum que peut acquérir cette protéine dans ces conditions 

 déterminées, est plus faible que celle du chymotrypsinogène (2-4 au lieude4-0). 

 Les ruptures chymotrypsiques n'empêchent donc pas la formation du centre 

 actif. Mais elles changent vraisemblablement sa structure dans un sens 

 défavorable, en modifiant par exemple les distances entre les divers groupe- 

 ments constituant le centre. En fait, les néochymotrypsinogènes donnent 

 naissance aux chymotrypsines de l'activation 'lente' (chymotrypsines de type 

 a) dont l'activité spécifique est inférieure à celle des chymotrypsines-7r et 8. 

 Tout semble ainsi se passer comme si les proteolyses limitées qu'effectue 



* La Chromatographie ne permet pas non plus, comme nous allons le voir tout à 

 l'heure, de purifier complètement les protéines en question. 



