164 P. DESNUELLE ET M. ROVERY [10 



III. ETUDE PRÉLIMINAIRE DE L'ATTAQUE DU 



CHYMOTRYPSINOGÈNE PAR LA 



LEUCYLAMINOPEPTIDASE 



Les proteolyses précédentes sont assez simples pour que leur mécanisme 

 puisse être éclairci de façon complète. Mais, l'endroit précis où elles se 

 produisent, c'est à dire leur position absolue et relative dans la molécule 

 nous restera inconnu aussi longtemps que l'ordre d'enchaînement des résidus 

 de cette molécule n'aura pas été déterminé. En attendant que ce travail ait 

 été réalisé, il paraît intéressant d'attaquer le chymotrypsinogène par des 

 enzymes doués d'une spécificité précise de position et d'observer les réper- 

 cussions de cette attaque sur l'activité potentielle du zymogène. Nous avons 

 dans ce but utilisé la leucylaminopeptidase du rein récemment purifiée par 

 Smith et al.^^ On sait que cet enzyme agit de préférence sur les peptides. 

 Mais il attaque aussi certaines protéines à partir de leurs extrémités N- 

 terminales.^*'^^ 



Le chymotrypsinogène contient un résidu N-terminal de demi-cystine.^° 

 Ce résidu n'est pas simplement relié au reste de la molécule par son pont 

 disulfure (schéma A) car il suffirait alors d'oxyder le dinitrophényl (DNP) 

 chymotrypsinogène par l'acide performique pour obtenir de l'acide DNP- 

 cystéique libre. Or, ce dérivé n'est obtenu qu'après oxydation et hydrolyse. 

 Le résidu de demi-cystine ne se trouve pas non plus, comme on l'a sug- 

 géré,^^ en position latérale sur un groupe e — NH2 de la lysine (schéma B). 



Cy Lys S— 



I 1 I 



S NH NHgCy.Gly— 



I I 



S CO 



I NHaCys 



NHaCyCOOH 



ABC 



L'expérience suivante montre qu'il est situé à coté d'un résidu de glyco- 

 colle (schéma C): Du DNP-chymotrypsinogène oxydé par l'acide per- 

 formique est hydrolyse pendant 30 min. dans HCl 6 N bouillant. Le résidu 

 solide est hydrolyse à nouveau dans les mêmes conditions. Les fractions 

 solubles obtenues après trois opérations semblables sont évaporées et traitées 

 par le Dowex-50 x 8 forme H+.^° Les substances non-adsorbées sont chroma- 

 tographiées sur papier dans le système butanol-acide formique. La seule 

 tache jaune obtenue, dont le Rf est identique à celui de l'acide DNP- 

 cystéique, est chromatographiée à nouveau à l'aide de méthyléthylcétone 

 saturée d'eau ou de phénol tamponné à pH 4. On obtient dans les deux cas 

 deux taches jaunes dont l'une migre comme l'acide DNP-cystéique et l'autre 



