10] PROTEOLYSE DU CHYMOTRYPSINOGÈNE 167 



9 unités d'enzyme par /x-mole de substrat ont alors engendré au bout de 

 23 h. environ 0-5 mole/mole de 7 ou 8 amino acides, parmi lesquels se trou- 

 vait le glycocolle qui occupe la deuxième position dans la séquence N- 

 terminale. On pouvait donc avoir l'espoir d'avoir attaqué le chymotryp- 

 sinogène à l'endroit attendu. Toutefois, si la liaison cystyl-glycocolle avait 

 été réellement rompue par l'aminopeptidase, le résidu de demi-cystine n'aurait 

 plus été attaché que par son pont disulfure (voir plus haut) et il aurait été 

 susceptible d'être détaché par une simple oxydation. En fait, l'attaque en- 

 zymatique ne modifie en rien le comportement de ce résidu. 



Le fait surprenant n'est d'ailleurs pas que l'aminopeptidase éprouve 

 quelques difficultés à attaquer la séquence N-terminale du chymotrypsino- 

 gène. Cette séquence se compose en effet d'un résidu un peu particulier de 

 demi-cystine et d'un résidu de glycocolle pour lequel l'enzyme ne semble 

 pas posséder beaucoup d'affinité. Des expériences ultérieurs nous diront si 

 la séquence en question peut être attaquée dans d'autres conditions et si 

 les séquences des néochymotrypsinogènes et des chymotrypsines sont plus 

 accessibles. Mais, malgré leur caractère négatif, nos observations montrent 

 dès maintenant avec quelle prudence il faut interpréter les résultats fournis 

 par l'aminopeptidase, surtout quand il s'agit d'expériences de longue durée, 

 réalisées sur des protéines dont la stabilité n'est pas absolue. 



RÉSUMÉ 



Le présent mémoire décrit en détail les proteolyses limitées subies par le 

 chymotrypsinogène de boeuf au cours de ses activations 'rapide' et 'lente'. 

 Il donne aussi quelques indications préliminaires concernant l'action de la 

 leucylaminopeptidase sur ce zymogène. 



1. L'activation du zymogène résulte de la rupture d'une seule liaison 

 reliant un résidu d'arginine à un résidu d'isoleucine. La chymotrypsine-7r 

 ainsi engendrée s'autolyse au niveau d'une liaison leucyl-sérine, en donnant 

 la chymotrypsine-S dont l'activité est identique et un dipeptide, la séryl- 

 arginine. Le phénomène est très spécifique. Chaque enzyme coupe une seule 

 liaison à concurrence de 95%. La rupture de la liaison leucyl-sérine, laquelle 

 est séparée de la liaison arginyl-isoleucine par deux résidus seulement, ne 

 provoque aucune activation. 



2. Pendant l'activation 'lente', deux processus supplémentaires ont le 

 temps de se dérouler: l'attaque chymotrypsique du chymotrypsinogène et 

 l'autolyse de la chymotrypsine-S. Ces deux processus provoquent la rup- 

 ture des deux mêmes liaisons (tyrosyl-thréonine et asparaginyl-alanine) et 

 la libération d'un dipeptide (la thréonylasparagine). Les nouvelles protéines 

 ainsi engendrées (néochymotrypsinogènes) sont encore activables par la 

 trypsine. Mais leur activation est plus lente et les chymotrypsines formées 

 sont moins actives. 



3. Etant le précurseur d'un enzyme protéoly tique et étant extrêmement 

 vulnérable vis-à-vis de la trypsine, le chymotrypsinogène ne paraît pas doué 



