264 SCHRAMM, BRAUNITZER, ANDERER, SCHNEIDER, UHLIG [15 



den gleichen Wert fanden Schramm und Braunitzer^ an dem von ihnen 

 untersuchten TMV-Stamm. Gegen die enzymatische Methode können nun 

 gewisse Bedenken erhoben werden. Braunitzer^"'^^ bestimmte daher die 

 Carboxylendgruppe auf chemischem Wege mit der Hydrazinmethode von 

 Akabori. Als einzige Endgruppe wurde ebenfalls Threonin und zwar in 

 einer Menge von 1 Mol je 15 000 g Virus festgestellt. Bei kurzzeitiger Ein- 

 wirkung von Hydrazin (3-4 Stunden bei 100°C) gelang es auch, das Dipeptid 

 Ala-Thr und das Tripeptid Pro-Ala-Thr in Form ihrer Dinitrophenyl(DNP)- 

 Derivate zu isolieren. Nach Abspaltung des Threonins mit Carboxypeptidase 

 trat als einzige Endgruppe Alanin auf und zwar wiederum in einer Menge 

 von ein Mol je 16 000 g Virus. Zu etwa den gleichen Ergebnissen kamen 

 unabhängig hiervon Niu und Fraenkel-Conrat.^^ 



Die Bestimmung der N-terminalen Konfiguration in der Peptid-Unterein- 

 heit des TMV bietet Schwierigkeiten. Im nativen Virus sind keine end- 

 ständigen Aminogruppen nachweisbar^*-^^. Nach Behandlung des Virus mit 

 Trichloressigsäure (pH 1,8, 30 Minuten bei 85°C) konnte jedoch Prolin als 

 Amino-endständige Gruppe nachgewiesen werden. Die Bestimmung erfolgte 

 nach den Methoden von Sanger^^ und Edman.^'^ Mit beiden Methoden 

 wurden Werte gefunden, die der Menge der Carboxylgruppen entsprechen. 

 Die Schwierigkeiten bei dem Verfahren nach Sanger liegen darin, dass DNP- 

 Prolin während der sauren Hydrolyse zu Dinitrophenol und einigen in 

 geringen Mengen auftretenden Nebenprodukten gespalten wird.^^ Dieser 

 Abbau kann teilweise unterdrückt werden, indem man die Hydrolyse in 

 nahezu wasserfreiem Medium ^^ durchführt. Nach Kontrollversuchen liefern 

 die anderen DNP-Aminosäuren bei der sauren Hydrolyse kein Dinitrophenol, 

 so dass die Menge an endständigem Prolin ziemlich genau sich aus der 

 Bestimmung von Dinitrophenol + DNP- Prolin ergibt. 



UNTERSUCHUNGEN ÜBER DEN EDMANSCHEN 



ABBAU 



Auch bei der Bestimmung der Endgruppen nach Edman an dem mit Tri- 

 chloressigsäure behandelten Protein ergeben sich gewisse Komphkationen. 

 Das Thiohydantoin des Prolins ist unter den Bedingungen der CycHsierung 

 instabil und liefert in kleinen Mengen ein Beiprodukt mit einem etwas 

 geringeren Rf-Wert. Die quantitative Auswertung der beiden Flecken des 

 Chromatogramms ergab F2400 endständige Prolin-Moleküle je Molekül 

 TMV. Daneben fanden wir in einer Menge von etwa 20% noch andere 

 Thiohydantoine, diese entsprechen teilweise Endgruppen, die bei der Tri- 

 chloressigsäure-Behandlung im Innern der Peptidketten freigesetzt wurden. 

 Ausserdem reagiert aber das Phenylthioisocyanat (PTI) mit gewissen nicht- 

 endständigen Aminosäuren unter Bildung von Thiohydantoinen, wie wir an 

 reinen synthetischen Peptiden feststellten. Bei einstündiger Reaktionsdauer 

 mit PTI bei 40° entstanden aus Leu-Gly-Gly und Ala-Gly-Gly 3-7% 



