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 l'existence, dans le lysozyme, des enchaînements suivants (tableau 3), Mal- 

 heureusement, certains de ces enchaînements présentent encore un caractère 

 quelque peu hypothétique. 



D'autre part, enfin, Ohno,^* après avoir soumis le lysozyme à une hydra- 

 zinolyse ménagée, a été conduit à proposer comme enchaînement C-terminal 

 de la protéine: Asp.Gly.Ala.Asp,(NH2).Leu. On verra cependant plus loin 

 que cet enchaînement ne paraît pas correspondre à la réalité. 



Les diverses techniques d'obtention ou de séparation des peptides à partir 

 du lysozyme, telles qu'elles ont été utilisées jusqu'ici, ne permettaient pas, 

 à elles seules, d'aller beaucoup plus loin dans ce genre de travail. D'autre 

 part, la difficulté d'établir des enchaînements avec certitude nécessitait l'utilisa- 

 tion de nouvelles investigations dont les résultats devaient permettre de con- 

 firmer, ou éventuellement d'infirmer les conclusions tirées jusqu'alors. Aussi, 

 avons-nous poursuivi nos investigations d'une part en utilisant des procédés de 

 scission de la molécule protéique aussi spécifique que possible, et d'autre part, 

 en mettant en oeuvre, pour la séparation et l'analyse des peptides résultant de 

 cette scission, l'élégante méthode de Hirs, Moore et Stein. ^^ Cette méthode 

 permet, en principe, de recueiller et de séparer la totalité des peptides pro- 

 venant de la scission d'une protéine. 



HYDROLYSE DU LYSOZYME PAR LA TRYPSINE 



Pour avoir un nombre de peptides raisonnable, nous nous sommes adressés 

 tout d'abord à l'hydrolyse enzymatique par la trypsine. La spécificité de 

 cet enzyme est maintenant bien étabhe; le fait qu'il ne coupe que les liaisons 

 peptidiques dans lesquelles sont impliquées, par leur groupe carboxylique, 

 l'arginine et la lysine, faisait prévoir que le nombre maximum de peptides 

 différents que l'on pouvait obtenir à partir du lysozyme était de 17 ou 18. 

 Mais la présence, dans la protéine, d'une série de boucles dues à l'existence 

 de ponts — S — S — fait que certains des peptides détachés par l'action de la 

 trypsine doivent avoir une structure compliquée et risquent de ne pas pouvoir 

 être séparés convenablement par chromatographic. Aussi l'action de la 

 trypsine a-t-elle été appliquée ici, non seulement sur le lysozyme n'ayant pas 

 subi de traitement autre qu'une dénaturation par la chaleur, mais aussi sur du 

 lysozyme dont les ponts — S — S — ont été rompus par oxydation et trans- 

 formés ainsi en un nombre double de groupes sulfoniques. 



Action de la trypsine sur le lysozyme non préalablement oxydé. Plusieurs 

 observations^^-^' ont montré que, comme d'autres protéines, le lysozyme 

 'natif, c'est-à-dire obtenu dans des conditions telles qu'il ait conservé toute 

 son activité enzymatique, est à peu près complètement résistant à l'action 

 de la trypsine, tout au moins dans les conditions habituelles. Pour que la 

 protéine puisse être attaquée par la trypsine, il convient donc de la dénaturer, 

 ce que l'on obtient facilement ici par chauffage d'une heure à 100° en solu- 

 tion aqueuse. Cette manière de faire a l'avantage de conserver intacts les 



