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16] STRUCTURE DU LYSOZYME 283 



du Vigneaud et col.'^^ On doit toutefois remarquer qu'il est pratiquement 

 impossible d'éviter lors de l'oxydation en question la destruction de la 

 majeure partie du tryptophane, qui se trouve essentiellement transformé en 

 kynurénine^^; il semble toutefois que, au moins dans la majorité des cas, la 

 transformation subie par les résidus de tryptophane n'entraîne pas la rupture 

 des liaisons peptidiques auxquelles ils prennent part. D'autre part, il semble 

 également que, dans les conditions actuelles, la destruction des résidus de 

 tyrosine soit à peu près complètement évitée. Néanmoins, il convient d'inter- 

 préter avec prudence les données obtenues à partir du lysozyme ainsi oxydé. 

 Le lysozyme oxydé a été soumis à l'action de la trypsine dans les mêmes 

 conditions que le lysozyme non oxydé. Les produits résultant de cette action 

 ont été séparés par chromatographic sur colonne de Dowex 50 X 2. Les 

 conditions de cette séparation et les résultats qu'elle a fournis sont indiqués 

 dans la fig. 2.^^ 



î 



■(.0 

 3,5 



3.0 

 2,5 - 



2,0 - 

 1,S - 

 1.0 - 

 O.S - 



35' C 



SO'C- 



Vol. chambra da mélange : 2 t. 



'j;^^^-C0.2NiPH3.1->1N,pH4,2J 



T0.1 , 



Fig. 2. Séparation des produits obtenus par action de la trypsine sur 25 /xM de lysozyme 

 oxydé. 



coloration de la réaction à la ninhydrine après hydrolyse alcaline. 



coloration de la réaction à la ninhydrine effectuée directement. 



On constate ici la présence de 17 pics; après cette première séparation, 

 les substances correspondant à chacun des pics ont été, comme dans le cas 

 du lysozyme non oxydé, soumises à divers contrôles concernant leur homo- 

 généité et ont été purifiées par les méthodes habituelles. Il a été ainsi possible 

 de caractériser de façon précise chacune de ces substances: la nature des 

 acides aminés et la composition des peptides sont données dans le tableau 6. 



En plus des acides aminés libres (leucine, lysine, arginine) et de l'ammoniac, 

 12 peptides ont été obtenus avec un rendement suffisant pour permettre 

 l'étude de leurs structures. Ces structures ont été établies pour 9 d'entre 

 eux. Les résultats trouvés, combinés à ceux précédemment obtenus (tableau 1) 

 ont permis d'attribuer à ces peptides les constitutions indiquées dans le 

 tableau 7. 



