VOL. 4 (195O) DPN AND GLYCERALDEHYDE PHOSPHATE DEHYDROGENASE 169 



mehr als das Hundertfache von einander abweichen. Die Tatsachen, die fiir eine sehr wenig disso- 

 ziierte Haftstelle sprechen, sind die, dass das Enzym beim Umkristallisieren oder bei der Dialyse 

 eine stochiometrische Menge DPN zuriickhalt. Aus Beobachtungen bei kinetischen Messungen geht 

 hervor, dass dieses DPN bei fiinffacher Verdiinnung des Enzyms nicht messbar dissoziiert. Obendrein 

 werden Belege dafiir erbracht, dass auch DPNH an das Enzym gebunden ist, und aus dieser Verbin- 

 dung durch zugesetztes DPN verdrangt werden kann bis zu einem Grade, welcher relative Affinitaten 

 des Proteins zur oxydierten und zur reduzierten Form von mindestens gleicher Grossenordnung 

 anzeigt. Die Tatsache, dass gebundenes DPN durch Adsorption an Kohle aus dem Enzym entfernt 

 werden kann, und dass die Austauschreaktion mit DPN welches mit P^- markiert ist eine rasche ist, 

 erlaubt den Schluss: a) dass die Bindung nicht covalenter Art ist und b) dass gebundenes DPN 

 messbar dissoziiert. 



Andere Angriffsarten auf das gestellte Problem zeigten keine Unterschiede auf zwischen der 

 Reaktion mit Enzym-DPN und der Reaktion mit einer katalytischen Menge Enzym plus zugesetztem 

 DPN. In beiden Fallen war, in Gegenwart eines Uberschusses an Substrat, die Reaktion erster Ord- 

 nung mit Bezug auf die gesamte DPN-Konzentration und das pn-Optimum war das Gleiche. Die 

 Gleichgewicntskonstante mit gebundenem und mit zugesetztem DPN war ebenfalls dieselbe. Jod- 

 acetat hinderte die Reaktion an der Bindungsstelle. Kinetische Untersuchungen, bei welchen gleich- 

 zeitig gebundenes und zugesetztes DPN reagierte, zeigten an, dass man sich mit wachsender Konzen- 

 tration des Letzteren einem Sattigungswert naherte; jedoch konnten die Ergebnisse nicht so darge- 

 stellt werden, dass sie eine unzweideutige Antwort auf die Frage gegeben hatten, ob zwei katalytische 

 Stellen bestehen. 



Es wurde gezeigt, dass gebundenes DPNH rasch mit Milchsaure-Dehydrogenase plus Pyruvat 

 reagierte, oder in umgekehrter Richtung gebundenes DPN mit Milchsaure-Dehydrogenase plus 

 Lactat. Auf der Grundlage der Annahme, dass gebundenes DPNH sehr wenig dissoziiert, miisste 

 die beobachtete Reaktionsgeschwindigkeit mit Milchsaure-Dehydrogenase durch Zusammenstosse 

 zwischen Proteinmolekeln erklart werden, oder durch die Bildung von geordneten Enzym-Kom- 

 plexen. Im Lichte der vorhandenen Belege gesehen bedarf die Hypothese, dass Glycerinaldehyd- 

 phosphat-Dehydrogenase zwei katalytische Stellen besitzt, welche sich in ihrer Afhnitat fiir DPN 

 unterscheiden, weiterer Untersuchung. 



REFERENCES 



^ J. F. Taylor, S. F. Velick, G. T. Cori, C. F. Cori, and M. W. Slein,/. Biol. Chem., 173 (1948) 619. 



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Received April 19th, 1949 



