VOL. 4 (1950) BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA I93 



TRIOSEPHOSPHORSAURE ALS INTERMEDIARPRODUKT BEI DER 

 ZUCKERGARUNG MIT INTAKTER HEFE 



WILHELM KIESSLING 



Biochemisches Laboratorium der wissenschaftlichen Abteilung von C. H. Boehringer Sohn, 



IngelheimjRhein [Deutschland) 



Der heute allgemein anerkannte Abbauweg bei der Vergarung von Zucker zu Alkohol 

 iiber phosphorylierte Intermediarprodukte wurde fiir den zellfreien Fermentextrakt 

 (Macerationssaft) als Schema im Jahre 1933 von O. Meyerhof^ im Princip das erstemal 

 aufgestellt und im Jahre 1935^ und 1937^ erganzend erweitert. Bei diesem Schema wird 

 zwischen Initialphase und stationarer Phase unterschieden. In der Erganzung von 1937 

 findet sich auch eine Erklarung fiir die Entstehung der HARDEN-YouNG'schen Ganings- 

 phase im zellfreien Macerationssaft ; aber gerade die Bildung von Hexoseestern ist fiir 

 die Gegner dieses Schemas immer ein Punkt der Kritik, nach der der Abbau des Zuckers 

 in der lebenden Zelle anders verlaufen sollte, weil bei ihr diese Ester als Garungs- 

 zwischenprodukte nicht nennenswert sich anhaufen und nachzuweisen sind. In einem 

 wirklichen stationaren Zustand ist nun die Anreicherung eines Intermediarproduktes 

 nicht zu erwarten, da jeder Fall dieser Art eine Zustandsanderung voraussetzt, sei es 

 Alterung, Hemmung durch Gifte oder Erschopfung von Nahrstoffen u.s.w. Auch die 

 Initialphase der Garung ist eine solche Zustandsanderung. Im folgenden soil die vor- 

 iibergehende Anreicherung einer Triosephosphorsaure als Intermediarprodukt bei der 

 Angarung von intakter Hefe beschrieben werden. 



METHODIK 



Triosephosphorsaure wurde nachgewiesen als Milchsaure, welche durch alkaUsche Verseifung 

 bei Zimmertemperatur nach der von O. Meyerhof und K. LoHMANN^a beschriebenen Reaktion 

 entsteht: Triosephosphat -> Milchsaure + Phosphat. Die so gebildete Milchsaure in den Garansatzen 

 wurde folgendermassen bestimmt: 20 ml Garlosung wurden filtriert, schwach Phenolphtalein-alkalisch 

 zur Trockne verdampft, 2 mal mit Wasser aufgenommen und nochmals verdampft, im Schwefelsaure- 

 exsiccator iiber Nacht getrocknet; dann in 20 ml Wasser gelost, und zur Verseifung der Triosephos- 

 phorsaure mit I ml 25% Natronlauge versetzt. Nach 10 Minuten Stehen bei Zimmertemperatur 

 wurde mit i ml 25% Salzsaure neutralisiert, mit CuS04-Ca(OH)2 gefallt, ein aliquoter Teil abge- 

 nommen und in der iiblichen Weise nach Friedemann, Contonio und Shaffer* die Milchsaure 

 bestimmt. Als Hefe wurde Weinhefe Steinberg aus Geisenheim am Rhein oder Weinhefe Oppenheimer 

 Kreuz aus Oppenheim am Rhein verwandt. 



Natiirliche Nahrsubstrate waren Traubenmoste oder Moste aus anderen Friichten. Als synthe- 

 tische Nahrlosung diente ein modifizierter Garansatz nach Henneberg^, bestehend aus 15% Rohr- 

 zucker, 0.2% Pepton, 0.5% KHjPO^, 0.2% MgSO^. pH 4-8. 



Um die Triosephosphorsaure zu isolieren und fernerhin die bereits vorgebildete Milchsaure von 

 derjenigen zu unterscheiden, die erst durch alkahsche Verseifung entsteht, wurden die Garansatze 

 durch Fallung mit Bariumacetat und Alkohol fraktioniert. Beim Fraktionieren wurden 20-50 ml 

 der mit Trichloressigsaure enteiweissten Garansatze mit Bariumacetat versetzt und bei schwach 

 lackmussaurer Reaktion mit 3 Teilen Alkohol gefallt. Der Niederschlag wurde mit Alkohol- Aether ge- 



Literatur S. 198. 



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