VOL. 4 (1950) 



SYNTHESE D'AMIDON CHEZ UN FLAGELLE 



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TECHNIQUE 



Le milieu suivant a ete utilis6: sulfate d'ammonium i g, SO^Mg + 7 HgO o.i g, PO^HjK 

 0.5 g, ac6tate de sodium i g, ^thanol 3 ml, thiamine 0.0 r mg, eau bidistiH6e i 1, soude pour p^ 7.0. 

 Apres sterilisation on ajoute du fer sous forme de citrate ferrique, sterilise a part, pour obtenir una 

 concentration finale de 10 mg/1. 



On utilise pour I'alimentation carbon6e un melange d'ac6tate de sodium et d'6thanol afin que 

 le Ph ne s'eloigne pas trop de la neutralite. Le pn augmente en efiet notablement lorsque I'aliment 

 carbone est represente par de I'acdtate de sodium — liberation d'ions Na~ — et diminue lorsque 

 I'aliment carbone est represente par de I'^thanol par suite de la liberation non compensee des ions 

 SO4 — de I'aliment azote. Avec le melange utilise, il n'y a pas de variation impDrtante du pn. et 11 

 n'est pas necessaire de tamponner le milieu. Seuls des milieux acides pauvent d'ailleurs etre tamponnes 

 efficacement sans inconvenient. Les flagell^s ne supportent pas une concentration de phosphate 

 M/25 a ph 7-0 alors qu'ils se developpent a pn 4-6 dans des milieux renfermant des phosphates a 

 concentration M/3.5. 



TABLEAU I 



VARIATIONS DE LA RESISTANCE AU PHOSPHATE EN RELATION AVEC LE pjj 



-\- + Culture abondante, plus de 1 000 fiagelles///! 

 + 200 a 1 000 flagelles//il 

 i I a 20 fiageiles//il 

 o moins de i flagelle/al 



Les phosphates utilises sont tous des phosphates R.A .L. ou Merck, quality Sorensen ou "pour analyse". 



L'ensemencement est effectue avec 20 ml d'une culture jeune dans des ballons renfermant 4 

 litres de milieu aeres par barbotage d'air et maintenus a 24°. Le barbotage doit etre menage au debut 

 afin de ne pas diminuer trop la tension de COg. Dans ces conditions, on obtient en 3 jours des cultures 

 tres abondantes. Celles-ci sont centrifugees dans une centrifugeuse Sharpless. A grande vitesse, les 

 flagelles eclatent. La pate blanchatre est broyee avec du sable fin lave. Le broyat est mis, suivant 

 les cas, en suspension dans un tampon de phosphate M/ioo ou de citrate M/50 de pH 7-0. Une premiere 

 centrifugation a faible vitesse ^limine avec le culot les grains d'amidon et des debris cellulaires. Le 

 liquide trouble qui surnage est centrifuge a 12000 tours dans une centrifugeuse angulaire et le culot 

 remis en suspension dans un tampon. 



MISE EN EVIDENCE D'UNE PHOSPHORYLASE 



Les preparations enzymatiques sont additionnees d'un tampon de phosphate et 

 d'amidon soluble. La concentration en phosphate est donnee dans le Tableau IL La 

 concentration finale en amidon est de 2 a 5 mg/ml. On constitue un temoin sans amidon. 

 Les tubes additionnes de toluene sont places au bain-marie a 24°. Apres traitement par 

 I'acide trichloracetique, le phosphate mineral est dose par la methode de Fiske et 

 SubbaRow^. Le Tableau II montre les resultats de quelques experiences. On voit qu'il 

 y a disparition du phosphate mineral en presence d'amidon. 

 Bibliographic p. 2y4i2y5. 



