244 BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA VOL. 4 (1950) 



n£cessit£ d'un coenzyme pour le fonctionnement 



DE LA DfiSULFINICASE 



par 



BERNADETTE BERGERET, FERNANDE CHATAGNER 

 ET CLAUDE FROMAGEOT 



Laboratoire de Chimie biologique de la Faculte des Sciences, Paris [France) 



L' action de divers extraits de foie sur I'acide cysteinesulfinique^ est susceptible de 

 presenter des irregularites notables, quoique ces extraits aient ete obtenus dans des 

 conditions apparemment identiques. Recherchant la cause de ces irregularites, nous 

 avons constate qu'elles sont dues, au moins en partie, a une perte plus ou moins impor- 

 tante en un facteur indispensable au fonctionnement de la desulfinicase, perte qui a lieu 

 au cours de la preparation de I'enzyme. Ce facteur est un coenzyme dont nous ignorons 

 encore la nature ; nous savons seulement qu'il est constitue par une molecule organique 

 et que, en dehors du foie, il existe egalement dans la levure. Dans le present travail, 

 nous donnons quelques resultats experimentaux qui mettent en evidence I'importance 

 de ce coenzyme dans la desulfination enzymatique de Tacide cysteinesulfinique. 



PARTIE EXPERIMENTALE 



La solution de desulfinicase est obtenue en traitant pendant 30 minutes k 0°, n g de poudre 

 acdtonique de foie de lapin- par n. 10 ml d'eau distillee. On centrifuge, lave le culot de centrifugation 

 avec un peu d'eau qu'on ajoute a la solution enzymatique, et on complete le volume a n. 10 ml avec 

 de I'eau. Le poids sec d'un tel extrait est de I'ordre de 30 mg par ml. 



Le? solutions de coenzyme debarrassees d'apoenzyme sont obtenues en traitant au bain-marie 

 bouillant pendant 4 minutes la solution enzymatique precedente. On ^limine par centrifugation les 

 proteines coagulees par la chaleur, et on concentre sous vide, de telle sorte que 10 ml d'une telle 

 preparation corresponde a un poids donne de la poudre acetonique extraite initialement. Le poids 

 sec d'une solution de coenzyme contenant I'extrait de i g de poudre acetonique de foie dans 10 ml 

 est de I'ordre de 10 a 15 mg par ml. 



Les tubes utilises dans les experiences et la mesure de I'activite des systemes enzymatiques ont 

 6te decrits anterieurement^. Les experiences sont faites ici en solution de bicarbonate de sodium a 

 0.16% et sous atmosphere d'azote contenant 10% d'anhydride carbonique; le pH du milieu est ainsi 

 de 7.3. La temperature est de 35°, et la duree d'action est de 2 heures. Les resultats sont exprim6s 

 en micromoiecules d'anhydride sulfureux degage. 



I. Separation du coenzyme par dialyse et reactivation de V apoenzyme par addition de 

 coenzyme 



Dans 5 tubes contenant chacun 130 micromolecules de cysteinesulfinate de sodium 

 dans 10 ml de solution de bicarbonate de sodium a 0.16%, on introduit: 



Tube 1 : 10 ml de solution d'enzyme additionnee de bicarbonate de sodium a 0.16%, 

 ■et correspondant a i g de poudre acetonique ; cette solution est preparee extemporane- 

 ment. Plus 5 ml de solution de bicarbonate. 

 Bibliographie p. 248. 



