182 V. SCRUEL 



premier gagne plus rapidement le fond que le second, de sorte qu'il se 

 forme deux couches : une couche inférieure, verte, et une supérieure, jaune. 

 Cette particularité augmente considérablement la sensibilité du procédé, 

 car elle empêche les flocons verts de masquer par leur prédominance les 

 flocons couleur de rouille. 



Appliquons le même procédé à l'eau bouillie et conservée pendant 

 plusieurs jours sous une couche d'huile; nous constaterons qu'elle ne ren- 

 ferme pas plus d'oxygène qu'immédiatement après l'ébullition. 



En voici un exemple. Deux ballons d'une capacité de 400 ce, conte- 

 nant chacun 300 ce. d'eau bouillie et légèrement carbonatée, sont remplis 

 jusqu'à mi-hauteur du col d'huile d'olive également bouillie, et portés à la 

 couveuse. Or, en opérant comme plus haut sur le premier ballon, après un 

 jour, et sur le second après trois jours, on ne parvient pas à obtenir le 

 moindre signe d'oxydation. Tous les flocons sont verts et restent verts. 



Nous avons ainsi prouvé que la fermeture à l'huile, telle qu'elle a été 

 exposée plus haut, empêche d'une façon absolue la rentrée de l'air, au moins 

 dans les délais de nos expériences. Les cultures, faites dans ces conditions, 

 sont donc bien des cultures anaérobies dans toute la rigueur du terme. Ce 

 point était important à fixer. 



4° Pour doser la quantité de sucre qui avait échappé à la fermenta- 

 tion, nous avons employé la solution de Fehling, et comme indicateur le 

 ferrocyanure de potassium dissous dans de l'eau acidifiée par l'acide acétique. 



5° Dans les expériences où des numérations de microbes étaient 

 nécessaires, nous avons procédé par dilution. Une quantité déterminée, 

 1 ce. par exemple, était introduite dans un litre d'eau stérilisée, et sur le 

 mélange nous prélevions de nouveau une quantité fixe pour la confection 

 des plaques de gélatine. 



6° A la fin de chaque expérience, nous avons vérifié la pureté de nos 

 cultures : 



a) par leur aspect; elles doivent présenter un trouble uniforme, sans 

 membranes ; 



b) par leur odeur; 



c) par leurs caractères microscopiques : bâtonnets courts, animés 

 souvent de mouvements, absence de spores; 



d) par les caractères de leur culture sur gélatine (voir Escherich et 

 Laruelle). 



D'autres indications d'une portée moins générale trouveront mieux leur 

 place ailleurs. 



