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toluène {; 7, alcool absolu i, xylol ou toluène ~\ 8, xylol ou toluène pur. 



Les principaux inconvénients de celte méthode sont : l'impureté des pro- 

 duits employés, les traces d'eau que contient presque toujours l'alcool 

 étliylique dit absolu, la contraction du protoplasma et le durcissement des 

 tissus dans le xylol ou le toluène. Enfin, le prix de revient de ces produits 

 est toujours élevé. 



J'ai cherché à supprimer ces inconvénients et à simplifier cette méthode 

 en réduisant le nombre de bains. Pour cela, j'ai employé l'alcool bulylique 

 normal qui est livré pur et absolument anhydre. Cet alcool est un produit 

 accessoire de la fabrication de l'acétone (procédé Fernbach); actuellement 

 on en fabrique annuellement plusieurs milliers de tonnes qui n'ont aucune 

 application industrielle. Ce produit a, sur l'alcool étliylique, l'avantage de 

 dissoudre la paraffine, ce qui supprime complètement le xylol ou le toluène. 

 C'est donc une simplification de la méthode, et les résultats ont prouvé que 

 c'était aussi une amélioration. 



Traitement des pièces anatomiqiies et des préparations. — L'alcool bulylique 

 normal dissolvant très peu d'eau {^i ^^ son volume), on ne peut pas préparer direc- 

 tement, par addition d'eau, la série des alcools à So", à 60° et à 8o^ Mais le mélange à 

 parties égales d'alcool éthylique à 96° et d'alcool butjlique norm:il pur est un très 

 bon dissolvant de l'eau. J'emploie donc ce mélange pour les quatre premiers bains. 

 Les calculs montrent qu'à loo'^"" de ce mélange il faut ajouter : 225""' d'eau pour 

 obtenir de l'alcool à So" (i^' bain); 62'''"', 5o d'eau pour obtenir de l'alcool à 60° (2" bain); 

 21*^"°', 87 d'eau pour obtenir de l'alcool à 80° (3» bain), et 2'^™', 63 d'eau pour avoir de 

 l'alcool à 95° (4" bain). 



C'est alors que s'introduit la simplification de la méthode. F.n elTet, il suffit de deux 

 bains successifs d'alcool bulylique normal pur pour achever le traitement des pièces 

 à inclure. Dans le second bain, on ajoute peu à peu de la paraffine, et l'on achève 

 l'inclusion comme d'habitude. 



Pour les coupes montées sur lames porte-objet, on remplace la série des alcools 

 éthyliques par la série. des alcools éthyliques et butyliques emj)loyée pour le traite- 

 ment des pièces à inclure. Enfin, pour le traitement des coupes de matériaux non 

 inclus dans la paraffine, on remplace les alcools éthyliques à 95" et à 100° par les 

 alcools butyliques correspondants. 



Rèsullats et avantages de cette méthode. — Les essais ont été faits sur des 

 tissus végétaux et sur des tissus animaux; fleurs développées avec leurs 

 divers tissus, jeunes boutons floraux, méristèmes de sommets végétatifs de 

 racines et de tiges, embryons de lapins. 



Dans tous les cas j'ai observé la parfaite conservation du protoplasma 

 sans aucune rétraction. Les colorations en masse faites avant l'inclusion 

 n'ont subi aucune altération, ce qui n'est pas le cas pour les autres méthodes. 

 Au moment de l'inclusion, les pièces ne sont ni dures ni cassantes, comme 



