SÉANCE DU l4 AOUT IQoS. 899 



grisâtre et un commencement d'hémolyse. Puis le milieu commence à se liquéfier 

 et dès le deuxième jour se divise en deux parties : une couche profonde comprenant 

 tous les éléments solides, et à la surface le sérum surnageant, recouvert d'un voile 

 très épais. Le quatrième jour le milieu devient plus homogène, uniformément brun et 

 le voile disparaît. 



Le 7^ jour, ces cultures filtrées d'abord sur papier, puis sur bougie Chamberland 

 marque F, donnent un liquide brun acajou. 



Sur le premier de ces milieux, les cultures présentent des caractères un peu diffé- 

 rents. On y constate également de l'hémolyse dans les 24 premières heures, mais, après 

 2 jours, le milieu se prend en une sorte de glaire. Dès le f\^ jour la gelée se liquéfie 

 et la culture redevient liquide prenant une teinte brune. Ces cultures comme les 

 précédentes donnent également un liquide brun acajou. 



Pour obtenir par ces procédés des cultures toxiques, certaines précau- 

 tions nous paraissent indispensables : 



1° Le sérum entrant dans la composition de ces milieux de culture doit 

 être chauffé à une température de 60°, pendant 3 heures. Ce chauffage 

 a pour effet de détruire les substances gênant le développement du vibrion 

 cholérique. 



2° La température de l'étuve doit être rigoureusement constante, et les 

 variations même de 1° nuisent à la production de la toxine. La tempéra- 

 ture optima pour l'obtention de cette toxine oscille entre 38° et 39°. 



3° Les cultures doivent être largement aérées : aussi employons-nous les 

 boîtes de Roux. D'autre part, pour augmenter cette aération, les boîtes sont 

 agitées chaque matin. 



4° Enfin, il faut faire usage, dans les ensemencements, d'un vibrion 

 n'ayant fait aucun passage sur les animaux. Diverses expériences auxquelles 

 nous nous sommes livrés à ce sujet nous ont permis de constater que les 

 passages diminuent le pouvoir toxigène avec une extrême rapidité. 



Par ce procédé nous avons pu obtenir une toxine cholérique avec 26 vi- 

 brions isolés à Saigon de selles cholériques, avec deux échantillons de la 

 collection de l'Institut Pasteur provenant l'un de Bombay, l'autre de Nasik, 

 enfin avec trois échantillons de choléra d'Egypte remis par M. Kolle lui- 

 même à M. Haffkine, les n°' 3, 13 et 74. 



Tous ces vibrions donnent une toxine d'une activité à peu près identique. 

 La dose mortelle pour le cobaye de 25os, en injection péritonéale ou sous- 

 cutanée, varie de | à { de centimètre cube. 



Pour le lapin, en injection intraveineuse, elle oscille entre ^ et ^ de cen- 

 timètre cube par loo^ d'animal. Il faut de 5""' à 10""' pour tuer en quelques 

 heures par la voie veineuse un chien de 5''« à 6'^^. 



