538 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 



cipité laissé sur le filtre avec une solution saturée de sulfate 

 (l'ammoniaque. 



!■■« méthode. — Pour la suite des opérations, tant que j'ai em- 

 ployé le premier procédé ci-dessus pour la préparation du milieu 

 de culture, j'ai dissous dans l'eau le précipité resté sur le filtre ; 

 éliminé autant que possible le sulfate d'ammoniaque dans un 

 courant d'eau pendant une quinzaine d'heures. Le liquide du 

 dialyseur était ensuite concentré dans le vide en présence de 

 l'acide sulfurique, puis précipité par l'alcool fort. Le précipité 

 était lavé à l'alcool absolu, puis séché. 



2^' méthode. — Quand le milieu de culture a été préparé par le 

 deuxième procédé, j'ai séparé la plus grande partie du sulfate 

 d'ammoniaque du précipité resté sur le filtre, en le traitant par 

 de la glycérine en quantité aussi faible que possible. Après deux 

 jours de contact, le liquide glycérique était décanté, puis je 

 remettais un peu de glycérine pour laver les corps non dissous 

 et je décantais de nouveau. Il se dissout bien ainsi un peu de 

 sulfate d'ammoniaque, mais en quantité minime; et les doses 

 qu'on en inoculerait ainsi aux animaux ne sont nullement 

 toxiques par elles-mêmes. On peut d'ailleurs diminuer encore 

 cette quantité de sulfate en mettant la solution de glycérine 

 pendant quelque temps dans un dialyseur. Ceci fait, la liqueur 

 est mise au contact de 4 fois son volume d'alcool fort. Le pré- 

 cipité ainsi obtenu est filtré, lavé à l'alcool absolu, puis à l'éther, 

 et enfin desséché dans le vide. On peut recommencer plusieurs 

 fois cette suite d'opérations en redissolvant le précipité dans u« 

 peu de glycérine. 



Cultures à 3G'\ — A cette température, la bactéridie pousse 

 assez bien dans la solution de peptone. La culture y est aban- 

 donnée à elle-même pendant une dizaine de jours, puis elle sert à 

 l'extraction de la toxine sèche. 



J'ai finalement une poudre grisâtre, assez soluble dans l'eau ; 

 la solution aqueuse est neutre aux réactifs colorés. 



La solubilité dans l'eau de cette substance est beaucoup 

 diminuée, si, lors de sa préparation, ce corps n'a pas été bien 

 desséché par l'alcool, puis lavé à l'éther. On a alors une matière 

 cornée assez adhérente au filtre et très peu soluble dans l'eau. 



Qu'elle soit préparée par la première ou la seconde méthode, 



