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poison actif d'autant plus grande que la température de chauffe 

 a été moins élevée. 



Mais la filtration élimine de ces recherches la proportion 

 notable de toxine qui a été retenue par la terre poreuse : aussi 

 les liquides sont-ils devenus, de ce fait, moins actifs qu'ils ne 

 l'étaient à l'origine. Pour mieux apprécier la teneur en poison 

 des cellules microbiennes, il convient de ne pas recourir à la 

 filtration. Par le repos à une température constante, les spores 

 que l'on fait macérer s'accumulent à la partie déclive du tube, 

 surmontées par un liquide limpide, dont les tranches supérieures 

 ne contiennent habituellement pas de bacilles. Eu puisant avec 

 précaution on recueille, pour les inoculations, un liquide privé 

 de germes ou n'en renfermant qu'un nombre négligeable. Si 

 l'expérieiice ainsi faite n'a paslamême rigueur quela précédente, 

 du moins elle offre l'avantage de ne rien laisser perdre de la 

 toxine abandonnée par les spores ; et alors, par l'injection de 

 doses relativement faibles, on peut vérifierla toxicité des liquides 

 de macération. Ainsi des dépôts de cultures de 1 à 2 mois dans 

 10,30, 50 c. c. de bouillon sont chauffés à 72° pendant 20, 30 et 

 môme 60 minutes, puis mis à macérer dans 5 ou 6 c. c. d'eau stérile. 

 Après 13 et 20 jours, 1 c. c. ou 0''%^'> de ces liquides donnent aux 

 jeunes cobayes un tétanos mortel. Celui-ci n'est point dû aux 

 quelques spores qui ont pu être introduites sous la peau, car 

 l'inoculation d'une quantité égale ou double du même liquide 

 préalablement chauffé 10 ou 13 minutes à 67°, ne détermine pas 

 la maladie chez les témoins. De même avec des dépôts de 

 culture chauffés 60 minutes à 80°, ou 10 minutes à 90°, on 

 constate que l'eau dans laquelle les spores ont été plongées 

 renferme assez de poison pour produire des symptômes téta- 

 niques chez les jeunes cobayes. 



Une macération de 13 ou 20 jours ne suffit pas pour extraire 

 la totalité du poison que contiennent les bacilles ; si on renou- 

 velle plusieurs fois le liquide, on peut encore, après deux mois 

 et plus, en trouver une quantité suffisante pour produire le 

 tétanos. Le dépôt d'une culture de un mois dans 50 ce. de bouillon 

 est chauffé pendant une heure à 72°,puisadditionné de 6 c. c. d'eau 

 stérile. De 15 en 15 jours, à quatre reprises différentes, on décante 

 le liquide et on le remplace par une égale quantité d'eau stérile. 

 Lé premier liquide décanté tue le cobaye à la dose de 0'^<'..3. Le 



