TUBERCULOSE ULCÉREUSE DU POUMON 303 



Pour faire les ensemencements en surfaces on prend le 

 matériel avec une aiguille de platine llamhée, et on le porte sur 

 la surface d'un tube de gélose ; on a soin de délayer le petit 

 fragment de crachat ou de pus dans le liquide exsudé au fond 

 du tube et on Tétale sur la surface de gélose ; sans recharger 

 l'aiguille, on recommence la même opération sur un second, 

 un troisième tube, etc. On fait ainsi de véritables plaques en 

 surface où toutes les colonies poussent bien isolées. On ense- 

 mence plus ou moins de tubes, selon la richesse bactérienne 

 du matériel. 



Pour pratiquer l'isolement des microbes anaérobies, nous 

 avons employé la technique indiquée par l'un de nous et que 

 nous décrirons rapidement à nouveau, parce qu'il sem])le 

 qu'elle n'ait pas toujours été bien comprise et parce qu'elle a 

 subi des perfectionnements depuis qu'elle a été publiée. 



Le milieu que nous employons est de la gélose à 10 p. 1000. préparée avec 

 la macéralion habituelle de viande (500 grammes pour 1000 d"eau) ; on y ajoute 

 5 grammes de sel marin, 10 grammes de peptone, 15 grammes de glucose et 

 1 gramme de nitrate de potasse (1). Le mélange cuit à lauloclave est alcali- 

 nisé et collé avec du blanc d'o'uf, chauffé à nouveau, filtré sur papier Chardin, 

 distribué dans des tubes et stérilisé comme d'habitude. Il faut emplir les 

 tubes sur une hauteur d'environ 10 centimètres. Le milieu doit être très clair 

 et transparent. 



Pour faire l'ensemencement, on fait fondre au bain-marie à 100 degrés un 

 nombre de tubes proportionné à la richesse en microbes du produit à examiner 

 (une dizaine de tubes environ). On les fait refroidir dans de l'eau à 38 degrés, 

 puis, se servant d'une pipette à longue effilure comme d'une aiguille de 

 platine, on prélève un peu de semence et on secoue la pipette successive- 

 ment dans les tubes, sans la recharger, pour faire des dilutions. Les tubes 

 sont plongés dans l'eau froide pour les solidifier et ensuite mis à l'étuve. Si 

 les dilutions ont été bien faites, les colonies se développent bien séparées 

 les unes des autres. Les microbes aérobies stricts poussent dans la zone 

 supérieure aérée, qui n'excède pas deux centimètres de hauteur; les anaé- 

 robies stricts ne poussent que dans la zone inférieure privée d'oxygène. 

 Les facultatifs évidemment poussent dans toute la hauteur du tube. 



Pour faire la prise des colonies on se sert d'une pipette à longue effilure. 

 brisée à l'extrémité, qu'on introduit à travers le milieu après flambage, jus(iu'à 

 la colonie qu'on désire prélever, et on la fait monter dans la pipette par de 1res 

 légers mouvements de va-et-vient. 



Pour cette pêche de la colonie, il est préférable de se servir du tube Guil- 

 lemot. Pour cela on prend un tube de caoutchouc souple de calibre propor- 



(1) Le nitrate de potasse est ajouté au milieu pour empêcher la production 

 des bulles de gaz (hydrogène) qui fragmentent la gélose et empêchent l'iso- 

 lement. \'oir Veillon et Mazé. De l'emploi des nitrates pour la culture cl 

 l'isolement des microbes anaérobies. Comptes rendais de In Soc de Biologie, 

 22 janvier 1910. 



