HÉMOLYSE ET ANTIHÉMOGLOBINE 205 



I. Préparation de l'hémoglobine à injecter. 



Rappelons d'abord que nous préparons l'hémoglobine à injecter comme 

 il suit : r centrifuger les globules du sang défibriné de vache suspendus 

 dans de Teau physiologique, jusqu'à ce que le liquide baignant les globules 

 rouges ne présente plus les réactions d'albumine; 2° faire éclater les glo- 

 bules dans de l'eau distillée chargée d'un peu d'éther; 3° dans cette solu- 

 tion de tout ce que le globule rouge peut livrer, précipiter tout ce qui est 

 insoluble à la demi-saturation de Am^SO,^ ; l'hémoglobine reste en dissolution ; 

 40 centrifuger ou filtrer, et le filtrat rouge clair est soumis à la dialyse. 

 Parfois, nous précipitions l'hémoglobine du filtrat par Am,SO^ à saturation 

 avant de le soumettre à la dialyse ; on obtient alors une solution beaucoup 

 plus concentrée de l'hémoglobine et la dialyse elle même est beaucoup 

 moins longue. 



Deux remarques pour justifier cette manière d'agir. 



Au 3°, nous précipitons les substances autres que l'hémoglobine par 

 Am^SO^ à la demi-saturation. Jusqu'ici, on traitait la dissolution des glo- 

 bules rouges, pour en écarter le stroma, soit en additionnant du sulfate acide 

 de potasse (une quantité inférieure à celle qui attaque l'hémoglobine), soit 

 en additionnant le NaCl nécessaire pour obtenir une solution à 1 0/0; le 

 précipité formé par l'une ou l'autre méthode était centrifugé, et la solution 

 d'hémoglobine maintenue aussi concentrée que possible (on atteignait des 

 concentrations de 40 0/0) était mise à cristalliser au froid. 



Or, remarquons-le, ce liquide, tel qu'on le fait cristalliser, contient 

 une quantité appréciable d'une pseudoglobuline fournie par le globule 

 rouge avec l'hémoglobine : il suffit de soumettre toute la solution à la demi- 

 saturation de Am^SO^ pour s'en convaincre. Écarter toute cette pseudo- 

 globuline par des cristallisations successives, cela n'est presque pas possible; 

 et pourtant il faut l'écarter, sinon on obtiendra une antipseudo-globuline. 

 Or, en règle générale, la production d'antipseudo-globuline est beaucoup plus 

 rapide et plus notable que celle de l'antihémoglobine seule. Ce facteur trou- 

 blant deviendrait donc réellement important; on ne pourrait plus attribuer 

 à l'antihémoglobine seule ce qui s'observerait sur le mélange des anticorps 

 produits. C'est pour cette raison que la comparaison des expériences de 

 NoLF et avec celles de Leblanc ne permet pas de certifier a priori que l'an- 

 tihémoglobine, telle que Leblanc l'a obtenue, donnera les phénomènes 

 sensibilisateurs que Nolf a observés. 



