19 



objecten van B — O uur, den tijd bepalende naar den ouderdom van 

 het stadium. Hieruit werden ze vervolgens overgeplaatst in alcohol 

 van 5ü°/o, vervolgens van 707o tot in dien van 90°/o, waarin ze 

 onder behoorlijke verversching der vloeistof zoolang bleven, totdat 

 het picrinezwavelzuur geheel uit de objecten getrokken en de ont- 

 kleuring volkomen was. In dezen alcohol konden ze voorloopig blijven. 

 Uit dit geconserveerd materiaal stelde ik mijne serieën te zamen, 

 terwijl de lengte van elk object mij tot maatstaf der ontwikkeling 

 diende i). Daar het mij uitsluitend om den kop te doen was, 

 scheidde ik dezen voor de verdere behandeling tot even achter de 

 gehoorblaas voorzichtig van het lichaam. Deze koppen werden uit 

 den alcohol van 90°/o achtereenvolgens in 70, 50 en 30 procent hou- 

 dende alcohol tot in aqua destillata overgeplaatst en daarna, ten 

 einde eene kernkleuring in toto te erlangen in GRENACHER'sche aluin- 

 karmijn overgebracht. In dit kleurmiddel bleven de voorwerpen 

 ongeveer 24 uur en werden vervolgens in aqua destillata uitge- 

 wasschen , welke vloeistof ik door acidum aceticum glaciale een 

 weinig zuur maakte, om uit het Amphibiënweefse\ , dat zoo gretig 

 kleurstoffen tot zich neemt, het overtollige aluinkarmijn te verwijderen. 

 Slechts enkele minuten bleven de voorwerpen in de zure vloeistof, 

 werden vervolgens herhaaldelijk uitgewasschen totdat al het zuur 

 verdwenen was en daarna van alcohol van 30 , 50 en 70°/o tot dien van 

 90°/o teruggevoerd. Wenschte ik nu van deze in toto gekleurde objecten 

 doorsneden te maken, dan werden ze voor geruimen tijd in abso- 

 luten alcohol geplaatst om de weinige sporen van water, die ze 

 nog bevatten te onttrekken en vervolgens hetzij aan de inwerking 



') Het microscopisch onderzoek leerde mij later dat deze wijze van ouderdoras- 

 bepaling — alhoewel voor zeer jonge erabryonen de eenige mogelijke — niet onberispelijk 

 was, aangezien embryonen van grootere afmeting dikwijls in ontwikkeling verre 

 achter stonden bij anderen die volgens hunne lengte jonger moesten zijn. 



