Allgemeine Methodik. Färbungsverfahren. (353 



Beobachtungen mit einer neuen Färbemethode. 



chron. Mitunter liegt der Kern neben der Sporenzweitheilung oder man 

 findet auch wohl einen Kern auf beiden Polseiten von der centralliegenden 

 Spore. Verf. macht sodann auf eine besondere Form der Sporen aufmerk- 

 sam mit Aequatorialauskeimung (in eintägigen Culturen nur im Centrum 

 nicht den Randpartien). Form meist rund oder rundlich oval in kürzeren 

 kettenförmig angeordneten Zellen. Reif bleiben sie ungefärbt, nehmen aber 

 in früheren oder späteren Stadien sehr rasch die Farbe diffus an, sodass 

 das Kernbild dabei nicht leicht sichtbar wird. Die Auskeimenden (auch in 

 der Bacterienzelle) sind grösser und zeigen an einer Seite höckerartige 

 Ausbuchtungen. Die leeren Sporenhüllen zeigen dann an einer Seite in der 

 Längsrichtung verlaufende Risse als Austrittspforten. Diese Sporenform 

 und ihre Mutterzellen werden erst spät gebildet, werden sehr rasch reif 

 und keimen früher aus, wobei aber, wenn die ungünstigen Bedingungen 

 fortdauern, die Mehrzahl zu Grunde geht. Dementsprechend findet man 

 in älteren Culturen sehr kümmerlich gewachsene kurze Bac. mit homo- 

 genem Protoplasma und relativ grossen Kernen, welche wohl auf solche 

 ausgekeimte Sporen zurückzuführen sind. — Für Heubac. gilt fast genau 

 das gleiche, nur sind dieselben 1. reif breiter als die Mutterzelle ; 2. ist die 

 Membran an ihren Polen stärker entwickelt; 3. die freien Sporen haben 

 keine Kappen, sondern oft unregelmässige Protoplasmafetzen ; 4. lässt man 

 zu einer Aufschwemmung einer alten Cultur, welche viel freie Sporen ent- 

 hält, ZiEHL'sches Carbolfuchsin zutreten, so färben sich (auch in den intra- 

 cellulären Sporen) Sporenkerne und Membranen intensiv roth, das Sporen- 

 protoplasma dagegen schwach rosa. Bei vielen freien Sporen quillt die 

 Membran an einem ungefähr im Aequator liegenden Punkte stark auf und 

 bildet allmählich einen kleinen Höcker, welcher sich dann auflockert, und 

 es entsteht daselbst eine kleine Oeflhung, oder die Oeffuung bildet sich dicht 

 neben dem Höckerchen, ehe dasselbe verschwindet. (Die ZiEHL'sche Lösung 

 giebt leider leicht Anlass zur Bildung von Körnchen.) 



Zur Erziehung von Bacteriensporen benutzte Verf. am liebsten pepton- 

 freies Agar (nach Büchner. Ref.). Impfung aus einer sporenreichen Cultur 

 nach Abtödtnng der vegetativen Formen. Milzbrand bei 37° enthielt nach 

 24 Stunden viel freie Sporen neben Bac. mit und ohne Sporen. Bei Heubac. 

 trat die Sporulation etwa einen Tag später ein. Bei Zimmertemperatur war 

 Alles verlangsamt, daher für die Beobachtung mitunter geeigneter. 



Um das Auskeimen der Sporen zu beobachten, untersucht Verf. eine Auf- 

 schwemmung im hängenden Tropfen im Mikroskop-Thermostat bei 37°, 

 während der Rest der Suspension ebenfalls neben dem Mikroskop in dem- 

 selben Thermostat bei 37 ° steht. Wenn die Sporen anschwellen und gleich- 

 zeitig ihren fetttröpfchenähnlichen Glanz verlieren, wird ein Tröpfchen 

 herausgenommen und nach Nakanishi gefärbt, aber auf äusserst schwach 

 gefärbten Objectträgern, da sich die Keimlinge sonst zu kräftig und diffus 

 färben. Die Sporenmembranen sitzen dabei meist vielfach noch kappen- 

 förmig an einem Ende. Freie Milzbrandsporen haben an beiden Enden (am 

 besten bei massiger Blendung) je einen halbmondförmigen, kappenförmigen 

 Ansatz, welchen Verf. als das achromophile Protoplasma der Sporenhälfte 



