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Zur Keinzucht diente wieder eine rein mineralische Nährlösung, welche in 

 100 g Aqu. destill. 



0,05 „ K^HPO, 



0,1 „ MgNH.PO, 6 Aq. 



0,01 „ CaSO, 

 enthielt und in einem Glaskolben den Boden etwa 1 cm hoch bedeckte. Der übrige 

 Baum wurde mit einem Gemisch von O und Methan angefüllt. Nach 2 — i Tagen 

 entsteht an der Oberfläche der Flüssigkeit eine rasch an Dicke zunehmende rötlich- 

 braune Haut, die der Hauptsache nach aus einer einzigen Bakterienart besteht von 

 der Form kurzer dicker btäbchen von 4 — 5 /t Länge, welche nachweislich das Me- 

 than verschwinden lassen und eine entsprechende Menge CO., erzeugen. 



5. Die N-fixierenden Bakterien. 



1) Clostridium. Ein uuerschöpflicher Vorrat von N, freilich in 

 ungebundenem Zustande, liegt in der atmosphärischen Luft, der den 

 Pflanzen nicht nur in dieser, sondern auch im Wasser gelöst geboten 

 wird. Bis in die neuere Zeit galt in der pflanzlichen Ernährungslehre 

 der von Boussingault aufgestellte Satz, daß der freie N für Pflanzen 

 bedeutungslos sei, indem er von ihnen nicht assimiliert werden könne. 

 Es ist nun aber neuerdings gezeigt worden, daß dies dennoch ge- 

 schieht, und zwar in erster Linie von Seiten einiger Bakterien, die 

 entweder für sich im Boden leben oder mit höheren grünen Pflanzen 

 vergesellschaftet sind. 



Schon Berthelot hatte beobachtet, daß sehr N-arme Bodenproben einen 

 merklichen Zuwachs an N gewinnen, wenn sie längere Zeit unter Verhältnissen 

 aufbewahrt werden, wo nur gasförmiger N zutreten kann, und daß diese An- 

 reicherung gänzlich fehlt, wenn die Proben vorher durch Erhitzen auf 100" sterilisiert 

 werden. Der Erfolg bleibt aus bei niederer Temperatur, tritt aber sonst sowohl in 

 geschlossenen Gefäßen, wie in freier Luft ein und ist im Dunkeln mehr ausgeprägt, 

 als im Lichte. Es war hierdurch die Mitwirkung lebender Organismen bei jenen 

 Vorgängern, durch welche N fixiert wurde, erwiesen. Berthelot machte auch 

 bereits den Versuch, dieselben zu isolieren und in künstlichen Kulturmedien zu 

 züchten, um ihre Eigenschaften näher zu studieren. 



Ziemlich gleichzeitig mit Berthelot hatte sich auch Winogradsky (118) die 

 Aufgabe gestellt, die betreffenden Bakterienformen zu isolieren. Als Kulturflüssigkeit 

 benützte er Lösungen von Mineralsalzen und sehr reiner Dextrose, welche absolut 

 N-frei waren. In 1000 g Wasser waren enthalten: 



Kaliumphosphat 1 g 

 MgSO^ 0,5 ., 



Zu je 100 ccm dieser Lösung wurden 2 — 1 g Glykose und CaCOg im Ueberschuß 

 hinzugefügt und dann ein Spur Erde ausgesäet. Die Kulturgefäße standen unter 

 einer hermetisch schließenden Glasglocke, durch welche ganz reine Luft strich. 

 Solche Kulturen zeigen bald ganz konstante Eigenschaften. ]\Ian beobachtet regel- 

 mäßig eine Gasentwicklung, die Bildung einer Säure (Buttersäure) und die Bildung 

 warzenförmiger Zoogloeamassen, die durch Gasblasen aufgebläht erscheinen, solange 

 noch Zucker in der Lösung zur Verfügung steht. Es ließen sich drei Arten von 

 Mikroben in denselben unterscheiden: 1) ein Clostridium, welches vorherrscht, 

 2) ein sehr feiner Bacillus in langen welligen Fäden, 3) ein großer Bacillus (2 y.) 

 in langen gegliederten Fäden. Es stellte sich heraus, daß nur das Clostridium 



