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peu différents suivant Ie but a atteindre. On peut se proposer da forcer chaque 

 cellule isolement a donner des spores, sans lui laisser Ie temps ni l'occasion de se 

 diviserou de bourgeonner préalablement ; ou bien on favorisera cette multiplication, 

 afin de poursuivre la sporulation dans les gemmes ou les colonies qui en résultent. 

 Dans Ie premier cas il faut un controle au microscope, dans Ie second on fera 

 usage de certains auxiliaires macroscopiques dont je parlerai plus loin. 



Pour observer la sporulation de la cellule de levüre isok-e, il faut, après une 

 nutrition abondante, la soumettrc a un épuisement complet. Les methodes un peu 

 surannées de M. Reess avec les tranches de carotte ou les petits bloes de platre 

 et d'argile ne m'ont jamais donné de rcsultats bien satisfaisants dans ce genre 

 de recherches. Je me sers simplement d'»agar pur« dissous dans l'eau distillée, 

 et refroidi de la maniere ordinaire dans des éprouvettes inclinées. S'il ne s'agit 

 pas de forcer chaque cellule individuelle a sporuler, mais que quelques bourgeonne- 

 ments préalables sont permis, on peut se servir aussi d'agar ordinaire, dissous 

 dans l'eau de la canalisation. J'entends par »agar pur« l'agar du commerce après 

 extraction complete des corps solubles au moyen d'eau distill-ée. Voici comment 

 on obtient cette extraction; on dissout 2%, d'agar dans de l'eau distillé bouillante, 

 on filtre, et on verse en couche mince dans une cuvette. Après solidification, on 

 coupe la plaque en tranches minces que l'on soumet a un lavage de plusieurs 

 semaines dans de grands flacons bouchés, en renouvelant fréquemment l'eau distillée. 

 Les corps solubles diffusent complètement dans l'eau, et l'on se trouve en possession 

 d'»agar pur«. Il y a en mênie temps un fort développement de bactéries, qui accélère 

 indubitablement l'extraction. Les bandes sont alors de nouveau fondues dans un 

 petit ballon et on en remplit les éprouvettes. On etend la levüre a étudier en couche 

 mince sur la surface inclinée d'agar, et l'on porte Ie tout a l'étuve a la température 

 voulue. Si Ie substratum est suffisamment préparé, les cellules se mettent aussitót 

 a former des spores, sans bourgeonner au préalable. On n'élèvera pas trop la 

 température, et l'on abandonnera les cultures pendant un certain temps. Une 

 température de 21 — 25" C. est suffisante pour les levüres acooliques ordinaires. 

 Chez Ie Schiz. octosporus on peut accélérer Ie phénomène en élevant la température 

 a 28—30° C, mais on ne fait ainsi qu'abrc-ger Ie temps nécessaire, attendu que 

 tót ou tard, au-dessus des 20° C, la même proportion s'établit entre cellules sporo- 

 gènes et asporogènes. En effet, c'est ce qu'on doit attendre, puisqu'il ne s'agit que 

 d'une qualité héréditairement fixée. 



L'observation de la sporulation dans les colonies et les stries reclame encore 

 moins de préparation que dans les cellules isolées. Je ferai remarquer aux débutants 

 que Ie processus peut parfaitement être distingué dans les cultures agées sur gelatine. 

 Si toutefois il se fait une protéolyse trop intense, accompagnée d'immersion des 

 colonies, ce qui empêche la sporulation, il est recommandable d'ensemencer sur 

 mout mélange d'agar ou parfois sur bière a l'agar. Sur ce dernier milieu il se fait 

 évidemment un bourgeonnement moins intense que sur mout a l'agar; de plus 

 Ie contenu cellulaire reste plus clair, ce qui a mon avis repose sur Ie fait que 

 dans les cellules cultivées sur Ie mout a l'agar il se forme plus de goutte- 

 lettes de graisse que sur la bière a l'agar, pauvre en sucre. Ces dernières cultures 

 seront donc a préférer pour la photographie et en général pour les recherches 

 cytologiques. 



