322 JOURNAL DR BOTANIQUE 



la préparation établie sur le couvre-objet, on la colore dans la 

 solution anilinée ordinaire de fuchsine ou mieux de violet demé- 

 thyle. On décolore rapidement par l'acide nitrique dilué au tiers ; 

 on lave à l'alcool, et on colore le fond par le bleu de méthylène 

 ou la vésuvine. On lave à l'eau et on monte au baume. 



La méthode des doubles colorations est encore précieuse 

 quand on veut mettre en évidence les spores endog-ènes formées 

 à l'intérieur de filaments bacillaires. On s'est contenté pendant 

 longtemps d'observer les spores endogènes sans les colorer : 

 leur réfringence, leur forme ovale suffisaient en général pour les 

 distinguer. Mais on constate souvent dans le protoplasma cellu- 

 laire des points réfringents tout à fait analogues, bien qu'ils 

 n'aient rien de commun avec les spores proprement dites : de 

 simples vacuoles ou, plus fréquemment, des gouttelettes grais- 

 seuses amènent une confusion qu'il n'est pas toujours facile 

 d'éviter. ^ 



Les procédés de simple coloration ne suffisent pas non plus 

 à différencier les spores de ces dernières formations. Tout aussi 

 bien que les spores les gouttelettes de graisse, par exemple, ne 

 se laissent pas pénétrer par la matière colorante, et l'absence de 

 coloration est un caractère qui ne permet pas d'établir d'une façon 

 certaine l'existence des spores. . 



On remédie à ces inconvénients de deux façons : i" en obte- 

 nant dans tous les cas la coloration des spores ; 2" en colorant 

 différemment les spores et le protoplasma cellulaire. Pour arri- 

 ver à ce double résultat on opère ainsi qu'il suit. 



La résistance des spores à la coloration étant due fort proba- 

 blement à l'existence d'une membrane d'enveloppe plus ou moins 

 épaisse, l'action de la chaleur permettra de surmonter cette ré- 

 sistance vitale. On passera donc à plusieurs reprises dans la 

 flamme la préparation desséchée comme nous l'avons vu précé- 

 demment ; seulement dans ce cas l'action de la flamme doit être 

 plus prolongée. On traitera ensuite par la solution à volume égal 

 d'alcool et d'éther. Ces deux précautions préliminaires rendent 

 à la fois la coloration plus facile et font disparaître les globules 

 graisseux qui sont dissous par l'éther. On plonge ensuite la pré- 

 paration dans une solution de bleu de méthylène qui colore éga- 

 lement le protoplasma cellulaire et les spores endogènes. On 

 traite après cela par quelques gouttes d'acide minéral qui déco- 



