PLATE IV 



Fig. 3. Autoradiogramme du mélange d'incubation. Dans 5 ml volume final: 

 tampon TRIS, pH 7,45; 250 /(moles; MgCls, ico/^moles; ADP ou ATP, 39,2 

 //moles ;Pm 5,8 /(moles avec 3200 lO'' coups /minute. Enzyme de levure — 0,208 mg 

 de protéine (AS = 10,2). Incubation à 30^ en agitant. 



La réaction est arrêtée par chauflfage i min à 100"^. Des prises de 0,1 sont pré- 

 levées pour la chromatographic descendante suivant la technique de Krebs & 

 Hems avec élimination préalable du phosphore minéral. Après 60 h d'incubation 

 une partie du liquide est dialysée 48 h contre l'eau distillée, 0,1 ml du dialysat est 

 prélevé pour la chromatographic. 0,1 ml est hydrolyse avec KOH (0,4 Nconc. fin.) 

 48 h 37 . 0,1 ml est hydrolyse avec 1,7 unité de ribonucléase des feuille [préparation 

 purifiée de Holden & Pirie [34] + tampon citrate (pH 5,5) 5 // m]. L'autoradio- 

 gramme montre l'apparition en fonction du temps d'un composé radioactif restant 

 au point de départ. Les autres composés radioactifs sont l'ATP et l'ADP. L'incu- 

 bation étant prolongée, les traces de myokinases sont suffisantes pour marquer 

 l'ATP. L'ADP et l'ATP sont éliminés par dialyse tandisque le composé du point 

 de départ reste. Il disparait après hydrolyse par l'alcali ou la ribonucléase, il y a trop 

 peu de substance pour voir apparaître dans cet autoradiogramme les produits 

 d'hydrolyse du polynucleotide. Si le mélange d'incubation contient l'ATP au lieu 

 d'ADP, il ne se forme pas de composés radioactifs. Le blanc correspond à une 

 photo dans l'U.V. de la partie du chromatogramme contenant les nucleotides 

 de référence. 



MARIANNE GRUKBËRG-MAKAGO 



