354 MARIANNE GRUNBERG-MANAGO 



rapide entre le 32p minéral et'le phosphate terminal de l'adénosine diphosphate, 

 le premier phosphate n'étant jamais marqué. Se basant sur ce test, cet enzyme 

 a été purifié et son activité a été ainsi augmentée de 20 fois. Elle est alors du 

 même ordre de grandeur que celle des preparations de polynucleotide phos- 

 phor>'lase employées dans les expériences exposées plus haut. 



L'enz>'me purifié de la plupart de phosphatases et d'une grande partie de la 

 myokinase est inactif sur les nucleosides 5 '-monophosphates ou triphosphates 

 comme l'AMP, ATP, CTP, UTP, GTP. Il incorpore l'orthophosphate 32p 

 dans le groupement terminal de tous les nucleosides diphosphates essayés 

 (GDP, UDP, CDP, IDP, ADP). 



L'incorporation de phosphate n'exige apparemment aucun cofacteur. Cette 

 réaction, à l'inverse de celle catalysée par l'enzyme bactérien, est même inhibée 

 de 50 à 70*)o par le Mg. Dans ces conditions, absence de métaux, l'enzyme, 

 même ajouté en grande quantité, ne hbère de phosphate à partir d'aucun des 

 nucleotides essayés mono-, di-ou triphosphates, bien qu'il incorpore très 

 rapidement celui-ci dans l'ADP. Ceci rend improbable la possibihté que l'incor- 

 poration de phosphate soit due à la réversibilité de la réaction catalysée par la 

 polynucleotide Phosphorylase. 



Lorsqu'on ajoute le Mg en assez grande quantité (2 x iq-^m) il se produit 

 une libération de phosphate à partir de l'ADP (20% environ de la quantité de 

 P incorporé). L'enzyme est également actif sur les autres diphosphates mais la 

 libération de phosphate reste toujours faible. Il n'y a aucune hbération de PO4 

 à partir de l'ATP ou de l'AMPa' il s'en produit ime très légère à partir de l'AMPs' 

 toujours 2 à 3 fois plus faible qu'à partir de l'ADP. 



Nous ne pouvons à l'heure actuelle décider si les 2 activités, incorporation de 

 P dans l'ADP et Hbération de P, sont dues au même enzyme. Mais il semble peu 

 probable que la hbération de phosphate soit due à une phosphatase ordinaire, car 

 on ne connait pas à l'heure actuelle de phosphatase inactive sur l'ATP et hydro- 

 lysant l'ADP spécifiquement. 



Après incubation prolongée de l'enzyme purifié en présence d'ADP et de 

 32Pm on s'aperçoit qu'il y a formation d'un composé absorbant dans l'U.V. qui 

 reste au point de départ du chromatogramme. Il ne diffuse pas pendant la 

 dialyse contre l'eau distillée ou les sels dilués, ce qui montre qu'il s'agit d'im 

 polynucleotide. Ce polynucleotide est radioactif à la différence du polymère 

 synthétisé dans les mêmes conditions par l'enzyme bactérien (Figure 3). Il est 

 hydrolyse par l'alcali et la ribonucléase des feuilles. 



Aucun polymère ne se forme en l'absence de Mg ou si l'ADP est remplacé 

 par le dérivé mono- ou triphosphorylé. 



La formation du polymère exigeant le Mg et l'échange étant au contraire 

 inhibé par celui-ci, la réaction doit procéder par deux étapes au moins. 



Comme l'enzyme de levure n'incorpore lui aussi le phosphate que dans le 

 groupement terminal de l'ADP, il est évident que la partie adenosine 5'-P04 de 

 l'ADP n'est pas marquée en présence de ^sp. Le polynucleotide synthétisé par 

 l'enzyme de levure étant radioactif ne peut être composé seulement d'unités 

 d'acide adénylique comme c'est le cas pour le polymère synthétisé par l'enzyme 

 bactérien, mais doit contenir des extra phosphates. 



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