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mir höchst wahrscheinlich, daß solche auch aus kernlosen Fragmenten 

 (bei monospermer Befruchtung) entstehen müßten. Um dies zu beweisen, 

 war es nötig, befruchtete kernlose Fragmente isolirt auf- 

 zuzüchten. 



Auch diese Versuche stellte ich mit Eiern und Sperma von Echinus 

 microtuberculatus an; das Verfahren, das ich dabei einschlug, war fol- 

 gendes. Die frisch aus einem Weibchen entnommenen Eier wurden in 

 der bekannten Weise geschüttelt. Dabei lösen sich viele Eier voll- 

 kommen auf, und das Wasser trübt sich milchig. Es wurde deshalb 

 die ganze Masse zunächst in ein großes Glas mit reinem Seewasser ge- 

 gossen, dann, nachdem sich die Eier und die größeren Fragmente zu 

 Boden gesetzt hatten, das Wasser einige Male gewechselt, bis es voll- 

 kommen klar blieb. 



Zur Isolation kernloser Fragmente wurde immer eine kleine Probe 

 des Schüttelmaterials vermittelst einer Pipette auf einen Objectträger 

 gebracht, wobei die Wasserschicht so bemessen wurde, daß sie gestattete, 

 noch mit Leitz VII ohne Eintauchen des Objectivs zu arbeiten. Durch- 

 mustert wurde die Probe zuerst mit Leitz III, welches Objectiv stark 

 genug ist, um in den Echinuseiern den Eikern deutlich zu erkennen. 

 War so ein möglichst großes, kernloses Fragment gefunden, so wurde 

 es mit Objectiv VII controlirt, ob nicht vielleicht eine Richtungsspindel 

 oder ein kleiner in Entstehung begriffener Eikern vorhanden sei. Ergab 

 sich auch hierbei ein negatives Resultat, so wurde das Stück mit einer 

 sehr feinen Pipette vom Objectträger abgenommen i). Dabei gelang es 

 gewöhnlich nicht, das ausgesuchte Fragment allein in das Röhrchen zu 

 bekommen, sondern es gingen auch benachbarte Stücke mit hinein. 

 Der Inhalt der Pipette wurde deshalb auf einen zweiten Objectträger, 

 der mit einer Schicht filtrirten Seewassers benetzt war, übertragen. Das 

 zur Zucht in Aussicht genommene Stück wurde nun wieder mit Ob- 

 jectiv III aufgesucht, mit Objectiv VII controlirt und unter Objectiv III 

 abermals mit der Pipette aufgenommen, wobei es nun in der Regel 

 schon gelang, es allein zu erhalten. Wenn nicht — man kann leicht 

 das Röhrchen horizontal unter das Mikroskop halten und seinen Inhalt 

 feststellen — wurde das gleiche Verfahren nochmals wiederholt. 



Die auf solche Weise schließlich isolirten Stücke kamen in ein Uhr- 

 schälchen mit filtrirtem Seewasser, und ich überzeugte mich hier jeweils 

 nochmals durch Zählung, ob neben den ausgesuchten Fragmenten nicht 

 noch etwas anderes mit hineingeraten war. In dem Uhrschälchen ließ 

 ich die Fragmente etwa 2 Stunden ruhig liegen, bevor ich Sperma zu- 

 setzte. Ich verfolgte dabei eine zweifache Absicht: 1) Die Fragmente 

 unmittelbar nach dem Schütteln sind unregelmäßig gestaltet, meist wurst- 

 förmig, und es dauert verschieden lange Zeit, bis sie kugelig werden. 

 Die Kugelgestalt schien mir aber — ich komme darauf unten zurück 



1) Daß bei allen diesen Proceduren die peinlichste Sauberkeit der 

 Gefäße und Instrumente beobachtet werden muß, versteht sich von selbst. 

 Auch darf man bei der Raschheit, mit der sich das Seewasser in so 

 dünner Schicht concentrirt, nicht zu langsam arbeiten. (Anmerkung 

 von 1895.) 



