IX. Die Enzyme. 225 



Meinen Pipette entnommen. Diese werden mit Essigsäure versetzt: 

 fällt kein Kasein mehr aus, so hat das Trypsin gewirkt, es kommt aber 

 auch hier sehr darauf an, daß man die richtige Menge Essigsäure zu- 

 setzt, weil Kasein in einem Überschuß der Säure wieder löslich ist. 

 Mit einer hergestellten 14 prozentigen Essigsäure ermittelt man, wie- 

 viel Tropfen man zu dem frisch bereiteten Kasein -Fermentgemisch, 

 in dem das Trypsin noch nicht gewirkt hat, zugeben muß, um eine 

 gute Fällung zu erreichen, und gibt dann im eigentlichen Versuch die 

 Säure diesem Vorversuch entsprechend zu. Die Methode ist äußerst 

 empfindlich und so rasch durchzuführen, daß der Zusatz eines Des- 

 infektionsmittels unnötig ist. Allerdings kann man hier Trypsin nicht 

 von Erepsin unterscheiden, welches Kasein ebenfalls verdaut. Nach 

 E. Abderhalden führt man den Nachweis tryptischer Fermente 

 sehr scharf durch Spaltung geeigneter Polypeptide, wobei der Eintritt der 

 Spaltung durch das Auskristallisieren schwer löslicher Aminosäuren oder 

 durch Drehungsänderung im Polarisationsrohr angezeigt wird. Glyzyl-1- 

 tyrosin ist bei Beobachtung der Aminosäuren-Ausscheidung sehr ge- 

 eignet: 5 ccm der auf Ferment zu prüfenden Lösung bringt man mit 

 0,2 g Glyzyl-1-tyrosin und 2 Tropfen Toluol für mehrere Stunden in 

 den Brutschrank; es tritt eine Trübung auf, die nach einiger Zeit zur 

 Abscheidung der charakteristischen, unter dem Mikroskop leicht er- 

 kennbaren Kristalle von Tyrosin führt. Papayotin kann durch 

 seine Wirkung auf Serum oder Eieralbumin nachgewiesen werden. Zu 

 der Fermentlösung wird ein wenig dreifach verdünntes Blutserum oder 

 Eieralbumin bei schwach essigsaurer Reaktion in eine Eprouvette ge- 

 tan und das Ganze sofort aufgekocht, vom koagulierten Eiweiß ab- 

 filtriert und mit dem Filtrat die Biuretreaktion angestellt. Bei Gegen- 

 wart von Papayotin gibt das Filtrat noch in starker Verdünnung eine 

 sehr intensive rote Biuretreaktion. L i p a s e wird auf die Emulsion 

 eines Neutralfettes einwirken gelassen und an dem Auftreten freier 

 Fettsäuren erkannt. Es gibt Lipasen, die nur bei sehr deutlich saurer 

 Reaktion (2 % Essigsäure) wirken, andere nur bei neutraler oder al- 

 kalischer Reaktion. Zur Sicherheit wird man drei entsprechende Parallel- 

 proben anstellen. Besonders geeignet statt des Neutralfettes ist Lezithin, 

 welches ebenfalls von den Lipasen zerlegt wird, deswegen, weil es mit 

 den Lipasen sehr gleichmäßige, haltbare Emulsionen gibt, wenn eine 

 abgewogene Menge des käuflichen Lezithins mit der 50 fachen Menge 

 destilUerten Wassers einige Stunden geschüttelt worden ist. Eine ab- 

 gemessene Probe der Mischung wird zunächst mit dem gleichen Volumen 

 absoluten Alkohols versetzt, um die von vornherein darin befindlichen 



freien Fettsäuren in Lösung zu bringen, und dann mit — Kalilauge 



gegen Phenolphthalein bis zur Neutralität titriert. Nach der Versuchs - 

 zeit wird diese Titration nach Alkoholzusatz wiederholt und so die 

 Bildung freier Fettsäuren durch die Lipase festgestellt. Eventuell kann 

 ein unwirksam gewordenes Präparat durch Zusatz von Manganosulfat 

 aktiviert werden (man verwendet auf zirka 10 ccm Ölemulsion 5 ccm 

 einer Lösung von MnS04 4 : 1000). Als Desinfiziens kann Chloralhydrat 

 dienen. 



Quantitative Bestimmung: Es kann sich bei der quan- 

 titativen Bestimmung von Fermenten niemals um absolute, sondern 

 immer nur um relative Werte von Vergleichsproben handeln, ferner 



(Träfe, Ernfthrungsphys. Praktikum. 15 



