IX. Die Enzyme. 227 



getreten ist oder wenn bei Zymase gerade eine bestimmte Menge Kohlen- 

 dioxyd gebildet ist, das man durch Auffangen in einem mit dem Gär- 

 kölbchen verbundenen Natronkalkrohr bestimmt, bei Pepsin gerade 

 eine vollständige Aufhellung des Rizins oder Edestins eingetreten ist, 

 bei Trypsin, wenn das Kasein gerade verschwunden ist, usw. 



Es sei als Beispiel die quantitative Bestimmung des diastatischen 

 Ferments nach J. W o h 1 g e m u t h ^) vorangestellt : Die dazu notwendigen 

 Reagenzlösungen sind 1. eine 1 prozentige Stärkelösung aus löslicher 



Stärke in destilliertem Wasser, 2. eine — Jodlösung. Eine Reihe von 



fortlaufend numerierten Reagenzgläsern wird mit absteigenden Mengen 

 der zu untersuchenden Fermentlösung beschickt, so daß in das erste 

 Gläschen 1 ccm, in das zweite 0,5 ccm, in das dritte 0,25 ccm, in das 

 vierte 0,125 ccm usw. kommen, und zu jedem Gläschen 5 ccm 1 prozentige 

 Stärkelösung dazugefügt. Jedes Röhrchen wird sofort, nachdem es die 

 Stärkelösung erhalten hat, in ein Gefäß mit Eiswasser gebracht, in dem 

 sich ein Drahtkorb zur Aufnahme der Gläschen befindet. Diese Ab- 

 kühlung bezweckt, vorläufig jede Ferment Wirkung hintanzuhalten. Dann 

 wird der Drahtkorb mit sämtlichen Gläsern in ein Wasserbad von 38 

 bis 40 ° übertragen und 30 Minuten bis 1 Stunde bei dieser Temperatur 

 belassen. Darauf kommen sämtliche Gläschen wieder für kurze Zeit 

 in das Eiswasser, damit die Fermentwirkung in allen gleichzeitig unter- 

 brochen werde; sie werden dann etwa bis fingerbreit vom Rande mit 



gewöhnlichem Wasser aufgefüllt und schließlich mit y^ Jodlösung in 



geringem Überschuß versetzt. Dabei treten verschiedene Färbungen 

 auf, wie dunkelblau, blau violett, rotgelb und gelb. Diejenigen Gläschen 

 welche eine gelbe oder rotgelbe Farbe aufweisen, enthalten kein höheres 

 Abbauprodukt der Stärke als Erythrodextrin oder Achroodextrin ; die 

 mit blauvioletter Farbe enthalten ein Gemisch von Stärke und 

 Erythrodextrin, die mit dunkelblauer Farbe vorwiegend unveränderte 

 Stärke. 



Als unterste Grenze der Wirksamkeit (limes) gilt dasjenige Gläschen, 

 in welchem zuerst die blaue Farbe erkennbar ist ; meist hat dieses Gläschen 

 eine violette Farbe, mitunter begegnet man aber auch Röhrchen, bei 

 denen neben einem starken roten Ton ein blauer kaum oder äußerst 

 schwach zu erkennen ist. In diesen Fällen, in welchen man also schwankt, 

 welches Röhrchen als limes anzusetzen wäre, fügt man am besten noch 

 einen Tropfen Jodlösung hinzu und beobachtet nun beim Umschütteln, 

 ob der blaue Farbenton bestehen bleibt oder in Rotbraun übergeht. 

 Im ersteren Falle wird dieses Röhrchen schon als unterste Grenze an- 

 zusehen sein, im anderen dagegen erst das nächstfolgende. Aus der 

 vor dem limes-Röhrchen stehenden Portion wird dann die Ferment- 

 wirkung so berechnet, daß man die Anzahl Kubikzentimeter einer 

 1 prozentigen Stärkelösung bestimmt, die durch 1 ccm der untersuchten 

 Fermentlösung in der gleichen Zeit bis zum Dextrin abgebaut wird. 

 Hat man beispielsweise den Versuch auf 30 Minuten bei einer Temperatur 

 von 38 ö ausgedehnt und gefunden, daß 0,05 ccm der Fermentlösung 

 gerade noch genügten, um 5 ccm Stärkelösung volllcommen bis zu Dextrin 



1) J. Wohlgerauth, Über eine neue Methode zur quantitativen Bestimmung 

 des diastatischen Ferments Bioch. Ztschr. 9, 1 (1908). 



15* 



