228 IX- Die Enzyme. 



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abzubauen, so würde sich daraus für 1 ccm berechnen D =777^ " 5 



rjo 0,05 

 = 100, wobei mit er D die diastatische Kraft für 1 ccm der Enzymlösung 

 verstanden A^ird. Dauert der Versuch längere Zeit, so muß man einen 

 Tropfen Toluol als Desinfiziens zufügen. Indessen hat Wohlgemuth 

 die Methode so verfeinert, daß man auch bei sehr geringen Diastasen- 

 mengen mit einer Versuchsdauer von 30 — 60 Minuten auskommt; man 

 verwendet dann statt der 1 prozentigen Stärkelösung eine nur 1 promillige 

 und setzt von dieser nur 2 ccm zu jedem Gläschen hinzu ; dann kommen 

 die Gläschen in ein Wasserbad von 38 — 40 ", werden nach 30, respektive 

 60 Minuten herausgenommen, abgekühlt und nun nicht mit Wasser 

 aufgefüllt, sondern sofort mit Jod versetzt, wozu man sich hier ebenfalls 



nicht einer — , sondern einer — Jodlösung bedient. Man verwendet 



am besten Preßsäfte des betreffenden Organs. 



Wollen wir eine bestimmte Lösung auf ihren Gehalt an Pepsin 

 untersuchen, gehen wir folgendermaßen vor i) : Man stellt in der vor- 

 her beschriebenen Weise eine saure Rizinaufschwemmung her. Ferner 

 werden 0,2 g käufliches Pepsin in 100 ccm Wasser gelöst und in einem 

 Vorversuch ausprobiert, wieviel Kubikzentimeter nötig sind, um 5 ccm 

 der Rizinaufschwemmung im Wasserbad von 38 ° in einer zur Beobachtung 

 geeigneten Zeit aufzuhellen. Angenommen, daß 1 ccm unserer Pepsin- 

 lösung diese Aufhellung gerade in 25 Minuten zustande bringe, während 

 0,9 ccm dies nicht vollkommen tun. Darauf stellt man von der zu 

 untersuchenden Pepsinlösung Verdünnungen in folgender Weise her: 

 8 Eprouvetten werden mit je 1 ccm destillierten Wassers gefüllt; man 

 nimmt eine trockene Pipette von 1 ccm Inhalt, entnimmt der un- 

 bekannten Fermentlösung 1 ccm und gibt ihn in das erste Röhrchen, 

 wobei man gut vermischt, indem man mit derselben Pipette einigemal 

 aufzieht und wieder ausbläst. Dann entnimmt man mit derselben 

 Pipette 1 ccm der Mischung und überträgt ihn in die zweite Eprouvette ; 

 man mischt wieder, überträgt von der Mischung wieder 1 ccm in das 

 dritte Röhrchen, und fährt so mit derselben Pipette bis zum achten 

 Röhrchen fort. Nun setzt man zu jedem der Röhrchen je 5 ccm der 

 Rizinaufschwemmung mit einer die entsprechende Menge enthaltenden 

 Meßpipette, indem man sukzessive aus ihr je 5 ccm abläßt; dieses Ein- 

 füllen soll möglichst rasch und in einem mit Eiswasser gefüllten Topf 

 vorgenommen werden. Man notiert dann die Zeit und setzt alle Röhrchen 

 auf einem Gestell in ein Wasserbad, dessen Temperatur möglichst genau 

 auf 38 ° C gehalten wird. Die Zeit, innerhalb welcher sich die einzelnen 

 Rizinproben gerade aufhellen, wird notiert, dasjenige Röhrchen, welches 

 dazu 25 Minuten braucht, ist von derselben Enzymkonzentration wie 

 die Testlösung, die als willkürliche Einheit angenommen war. Es sei 

 in unserem Versuche z. B. das dritte Röhrchen der Reihe mit der Ver- 

 dünnung 1 : 8. Dann ist die ursprünglich zu prüfende Fermentlösung 

 achtmal so stark wie eine Lösung von 0;2 g des angewendeten Test- 

 präparates in 100 ccm Wasser, entspricht also einer Lösung von 1,6 g 

 des Testpepsins in 100 ccm Wasser. Hier erkennt man den gewünschten 

 Endpunkt der Enzymreaktion, die Aufhellung, direkt, bei anderen 

 Methoden, z. B. der Trypsinbestimmung mittels der Kaolinmethode, 



') Nach L. Michaelis, 1. c. Seite 28, 



