IX. Die Enzyme. 231 



unter Schütteln eingeweicht, dann gibt man 80 ccm n-NaOH dazu und 

 füllt auf 2 Liter auf. Man erwärmt auf 90 °, um das Kasein in Lösung 

 zu bringen, und versetzt nach dem Abkühlen mit etwas Toluol. In eine 

 langhalsige Flasche mit zwei Marken bei 300 ccm und 400 ccm läßt man 

 zuerst zur Ansäuerung genau 11 ccm n-HCl einfließen, füllt auf 150 ccm 

 auf und gibt 100 ccm der Kaseinlösung zu. Dann wird auf 40 ^ erwärmt, 

 eine gemessene Menge der Pepsinlösung zufließen gelassen und auf 300 ccm 

 aufgefüllt. Solcher Kolben stellt man eine ganze Reihe auf und unter- 

 bricht in bestimmten Intervallen die Verdauung, indem man 100 ccm 

 20 prozentiger Natriumsulfatlösung zusetzt, wobei das unverdaute Kasein 

 ausfällt; es wird abfiltriert und je 100 oder 200 ccm des Filtrates mit 



_— NaOH unter Verwendung von Phenolphthalein titriert. Von der be- 

 stimmten Säuremenge zieht man die vorher bestimmte Azidität der 

 Kaseinlösung und der Pepsinlösung ab. Der Zuwachs an Säure beruht 

 dann auf der Bildung der salzsauren Peptone. Das ausfallende Kasein 

 bindet nämlich einen Teil der Salzsäure, bei Gegenwart von Peptonen 

 jedoch tritt zwischen Pepton und Kasein ein Wettstreit um die Salz- 

 säure ein, und es findet sich um so mehr HCl in Lösung, je mehr 

 Pepton im Vergleich zum Kasein vorhanden ist. Das Plus an ver- 

 brauchter Säure gibt also einen Maßstab für die Verarbeitung des 

 Kaseins. Den Fortgang der Reaktion kann man mittels physika- 

 lischer (optischer) Methoden an einer einzigen Probe verfolgen, wo- 

 rauf hier nicht eingegangen werden kann. (Über die diesbezügliche 

 von Abderhalden angegebene Methodik sei auf das Referat von 

 L. Michaelis im III. Band der ,, Biochemischen Arbeitsmethoden" 

 verwiesen.) Sehr wichtig ist das Konstanthalten der Temperatur bei 

 quantitativer Verfolgung der Ferment Wirkung, was am besten in einem 

 durch Thermoregulator auf konstanter Temperatur erhaltenen Wasser- 

 bade erreicht wird, in welchem die Röhrchen stecken; dagegen ist es 

 illusorisch, in einem Luftthermostaten zu arbeiten, da die Röhrchen 

 nur sehr schwer und langsam die Temperatur des Luftraumes annehmen. 

 Bei manchen Enzymen ist auch Bestrahlung von Einfluß und es ist 

 wohl am besten, nach dem Vorgange von Gräfe und Linsbauer 

 die Fermentwirkung in der Dunkelkammer bei rotem Lichte zu ver- 

 folgen. 



Um die Wirkungsstärke von diastatischen wasserlöslichen Malz- 

 präparaten des Handels zu bestimmen, kann man die Methode von 

 Egloffstein, welche von J. P o 1 1 a k modifiziert worden ist, 

 verwenden. Zur Bereitung des Stärkekleisters werden 9 g Arow-root- 

 Stärke des Handels und zirka 20 ccm Wasser in einer Reibschale bei 

 gewöhnlicher Temperatur verrieben und dann in 250 ccm heißen Wassers 

 unter allmählichem LTmrühren eingetragen. Das Gefäß mit dem Stärke- 

 kleister wird in ein Wasserbad gestellt und eine halbe Stunde im Sieden 

 erhalten. Hierauf wird der Kleister möglichst quantitativ in einen 

 300 ccm enthaltenden kubizierten Kolben gegossen, erkalten gelassen 

 und bis zur Marke aufgefüllt. 6 g des zu untersuchenden diastatischen 

 Produkts werden in einen 300 ccm fassenden kubizierten Kolben absolut 

 quantitativ gespült und bis zur Marke aufgefüllt. 50 ccm des 

 Stärkekleisters werden mit einer Pipette in ein 100 ccm fassendes, mit 

 Thermometer versehenes Kölbchen gebracht, auf 37,5 ° C erwärmt 

 und 20 ccm der 2 prozentigen zu untersuchenden Diastaselösung hinzu- 



