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dans un milieu nouveau des bactéries cultivées plus de trois mois 

 sur de l'agar-agar ne donne pas toujours de résultats satisfaisants. 

 les bactéries cultivées dans du bouillon conservent leur vitalité 

 jusqu'à deux ans. 



L'obtention de cultures pures, par l'ensemencement des milieux 

 nutritifs solides ou liquides avec les bactéries prises dans la nature, 

 ne présente pas de grandes difficultés. Cette obtention est facilitée 

 par le fait que le tissu ligneux attaqué par le chancre, s'il est pris 

 avec des précautions, suffisantes et a une certaine distance de la 

 surface des plaies, ne renferme pas d'autres microorganismes ca- 

 pables de se développer. Nous avons procédé de la manière suivante: 



Après avoir enlevé au moyen d'un couteau stérilisé, l'écorce du 

 bourrelet cicatriciel du chancre ou l'écorce d'une place de la branche 

 plus éloignée de la plaie, mais où le bois était visiblement attaqué 

 par les bactéries, nous découpions un morceau de ce bois. Nous 

 rognions ce morceau plusieurs fois, en changeant souvent de cou- 

 teau, pour atténuer la possibilité d'avoir laissé demeurer sur le bois 

 des microorganismes étrangers, qui auraient pu y être entraînés de 

 la surface de l'écorce. Possédant un morceau de bois ainsi netto\ é, 

 nous en découpions de fins copeaux, qui étaient placés immédiate- 

 ment à la surface de l'agar-agar dans des éprouvettes et v adhé- 

 raient fortement, ou bien étaient jetés dans des éprouvettes avec 

 du bouillon. 



Les éprouvettes ensemencées étaient tenues en lieu sombre à la 

 température ordinaire. 



Au bout de 3 ou 4 jours, quelquefois après 8 jours seulement 

 ou même plus tard, les bactéries commençaient à se développer, en 

 formant dans les milieux nutritifs stables de menues colonies au 

 bord des copeaux. Ces colonies se développaient rapidement, de sorte 

 que bientôt les copeaux de bois se trouvaient noyés dans la misse 

 des bactéries. En procédant avec précaution on obtient de cette 

 manière, dans une partie des éprouvettes au moins, des cultures 

 tout à fait pures. 



Quant aux éprouvettes avec du bouillon où les copeaux de bois 

 chancreux avaient été placés, on vivait au bout de -A ou 5 jours 

 que le liquide devenait légèrement troublé et qu'il s'y formait un 

 précipité blanchâtre — signe caractéristique du développement des 

 bactéries dans le liquide. 



Dans le bois malade, nous trouvons le bacterium mali dans toutes 



