(28) 1152 



Leidingwater ICO c.M^. 

 Manniet 1 G. 

 K2HPO4 0,05 G. 

 CaC03 0,5 G. 



Het is gemakkelijk in te zien, dat aan de eischen 1°, 2° en 3° 

 is voldaan. De afwezigheid van een stikstofbron maakt de vloeistof 

 langdnrig hondbaar na voorafgaande, sleclits korte sterilisatie. De 

 kans dat de vloeistof van buiten zou worden geïnfecteerd met azoto- 

 bacter, is praktisch uitgesloten. 



Ent men een kolfje met azotobacterkultuurvloeistof met Azoto- 

 bacter chroecoccum, dan verkrijgt men hiervan een reinkultuur. 

 Brengt men hierin een weinig van den te onderzoeken grond, dan 

 worden, behalve protozoën, ook vele soorten van bacteriën inge- 

 bracht. Het gevolg zal zijn, dat deze laatstgenoemde mikroben zich 

 zullen gaan ontwikkelen, wanneer in de vloeistof genoeg afgestorven 

 azotobactercellen aanwezig zijn, die aan de stikstofbehoefte in den 

 vorm van eiwit kunnen voldoen. In een met grond geïnfecteerde 

 azotobactervloeistof vindt men 11a eenige dagen, behalve azotobacter, 

 een groot aantal mikroben van allerlei grootte, afhankelijk van de 

 mikrobensoorten, welke de infectiegrond bevat. Het spreekt van- 

 zelf, dat zulk een bacteriënmengsel een uitstekende voedselbron is 

 voor protozoën van allerlei grootte, lietgeen dan ook bij het onder- 

 zoek van vele tientallen van grondmonsters gebleken is. De azoto- 

 bacteroplossing voldoet derhalve ook aan den 4den eisch. 



Men gaat uit van een azotobacterkultuur, omdat de grondinfectie. 

 vooral als ze gering is, dikwijls geen azotobacterkultuur geeft. 



Het voor de telproeven benoodigde manniet verkrijgt men het 

 best uit manna. Hiervan wordt zooveel in heet water opgelost, dat 

 stroopdikte verkregen is ; daarna laat men afkoelen, waarbij man- 

 niet uitkristalliseert. Met behulp van een kleine suikercentrifuge 

 wordt het manniet van de stroop gescheiden en gedekt met alkohol 

 van 97 vol. %. Voor het bereiden van geheel zuiver manniet moet 

 het onzuivere manniet meerdere malen worden opgelost en gecen- 

 trifugeerd, totdat de mannietmassa sneeuwwit is. 



Het gebruik van niet geheel zuiver manniet is ecliter voordee- 

 liger gebleken dan het zuivere preparaat, daar azotobacter zich in 

 de onzuivere oplossingen veel krachtiger ontwikkelt. Met een enkel- 

 voudige centrifugebewerking is dikwijls het manniet voor azotobacter- 

 kidturen al goed bruikbaar, indien n.1. de. manna niet al te veel 

 verontreinigingen bevat. 



