104 BOLETÍN DE LA SOCIEDAD ESPAÑOLA DE BIOLOGÍA 



medio líquido como sólido, teñidas por los procedimientos fundamenta- 

 les y por otros originales, que son modificación de aquéllos. 



Comenzaremos por exponer las técnicas de coloración empleadas, con 

 objeto de que nuestros trabajos puedan ser fácil y rigurosamente com- 

 probados. 



I. Coloración simple. — Llamamos así á la obtenida por la fuchina de 

 Ziehl, diluida al décimo ó con el azul de metileno fenicado, actuando 

 durante dos minutos sobre frotes fijados por el calor. Generalmente, des- 

 pués de teñidas las preparaciones por los métodos de Ziehl y de Gram, 

 teñimos el fondo con el azul de metileno fenicado y la fuchina de Ziehl 

 diluida, respectivamente; de este modo abreviamos tiempo, pues una sola 

 preparación nos demuestra lo que ocurre empleando la coloración simple 

 y el Gram ó Ziehl. 



II. Coloración por el Gram. — Tinción, durante dos minutos, de las 

 preparaciones fijadas por el calor, con el cristal violeta fenicado. Sin la- 

 var, tratar la preparación con el líquido de Lugol; lavar, decolorar con 

 el alcohol absoluto, hasta que deje de teñirse éste de color violeta; lavar 

 y coloración simple con la fuchina de Ziehl diluida. 



III. Coloración por el Ziehl-Neelsen. — Teñir en caliente, hasta emisión 

 de vapores, durante tres minutos, con la fuchina fenicada de Ziehl; 

 lavar ligeramente para arrastrar el exceso de materia colorante deposi- 

 tada sobre la preparación; tratar con el ácido nítrico diluido al tercio, 

 hasta descoloración completa; lavar, decolorar con el alcohol absoluto 

 hasta que deje de teñirse de rojo; lavar y coloración simple con el azul 

 de metileno fenicado. 



IV. Coloración por el procedimiento de Much. — Con la denominación 

 de procedimiento de Much, unos autores describen una técnica y otros 

 otra, que nosotros designamos con las letras A y B; hemos empleado las 

 dos y hemos obtenido iguales resultados. 



Much A. — Las preparaciones fijadas por el calor se dejan de veinti- 

 cuatro á cuarenta y ocho horas en un baño que contiene 1 cent. cúb. de 

 disolución alcohólica saturada, de violeta de metilo B por 10 de disolu- 

 ción de ácido fénico en agua al 2 por 100; después se tratan durante 

 doce minutos con el líquido de Gram ; lavar un minuto con ácido nítrico 

 al 5 por 100 de agua ; diez minutos con ácido clorhídrico al 3 por 100 de 

 agua; lavar, decolorar con alcohol y acetona á partes iguales, hasta que 

 deje de teñirse en violeta el líquido decolorante; lavar y teñir con fuchi- 

 na de Ziehl diluida, durante dos minutos. 



Much B. — Teñir, durante veinticuatro á cuarenta y ocho horas, con 

 el mismo baño que el procedimiento anterior; tratar con el líquido de 

 Gram, durante cinco minutos; lavar; decolorar con alcohol y acetona á 



