Abschnitt III. Methoden der Untersuchung. 43 
das Ganze zur Befreiung von allen Pilzkeimen ı Stunde auf 120° C.!) Die Uten- 
siliien, welche man zum Einbringen der Aussaat verwendet, werden am Besten 
durch Glühen sterilisirt. Das Einbringen muss schnell geschehen, damit nicht 
während desselben Keime aus der Luft in die Nährlösung gerathen. 
UI. Methoden zur Gewinnung reinen Aussaatmaterials. 
ı. Kress’ Methode der fractionirten Cultur.?) 
Sie beruht auf der Einsicht, dass von zwei oder mehreren Spaltpilzen, die 
sich in einer Nährlösung befinden, schliesslich gewöhnlich einer den oder die 
anderen überwuchert oder gar vollständig aus der Cultur verdrängt, und besteht 
darin, dass man einen kleinen Theil (/raczio) einer spaltpilzhaltigen Flüssigkeit über- 
trägt in pilzfreie Nährlösung (A), von der geernteten Spaltpilzmasse wieder einen 
kleinen Theil in neue Nährlösung(B) bringt, u. s. f. Man erhält so in den meisten 
Fällen schliesslich einen oder den anderen der in der Ursprungsflüssigkeit ent- 
haltenen Spaltpilze in vollkommener Reinheit, oft schon in der Cultur A, oft erst 
i1°B, oder &, D, E, F u. Ss. w. 
Daher ist diese fractionirte Cultur überall zu empfehlen, wo es nicht darauf 
ankommt, einen ganz bestimmten Spaltpilz, sondern einen beliebigen aus der 
Urflüssigkeit zu isoliren. 
2. NäcEeLfs Verdünnungsmethode.?) 
Wenn man aus einem, zwei oder mehrere Spaltpitze enthaltenden Substrat 
eine ganz bestimmte Art rein erhalten will, so kann man mit Vortheil diese 
zweite, neuerdings auch von BUCHNER angewandte Methode in Anwendung 
bringen. 
Sie setzt allerdings voraus, dass die rein zu züchtende Art oder Form in über- 
wiegender Menge vorhanden ist, und besteht darin, dass man die spaltpilzhaltige 
Flüssigkeit soweit verdünnt, dass auf je ein Tropfen etwa eine einzige der ge- 
wünschten Formen (Stäbchen, Coccen, Sehrauben etc.) koramt. Bringt man nun 
in eine grössere Anzahl mit Nährlösung beschickter Gefässe je einen Tropfen, so 
kann man fast immer sicher sein, dass man in einigen der Gefässe die eine ge- 
wünschte Form erhält. 
Beispiel nach NÄGELI: Aus faulem Harn, in welchem sich ausser Coccen noch Stäbchen 
befanden, sollten erstere rein erhalten werden. Ein Tropfen, welcher etwa 0,03 ccm fasste und 
nach Schätzung etwa 500,000 Pilze enthielt, wurde in 30 ccm pilzfreies Wasser gegeben. Aus 
dieser tausendfach verdünnten Flüssigkeit wurde, nachdem sie durch Schütteln wohlgemischt war, 
abermals ein Tropfen in 30 ccm Wasser eingetragen, und somit eine millionenfache Verdünnung 
hergestellt, in welcher je der 2. Tropfen (von 0,03 ccm durchschnittlich einen Pilz enthalten 
musste. Von Io pilzfreien Gläsern, von denen jedes mit einem Tropfen inficirt wurde, blieben 
4 ohne Vegetation, in ı bildeten sich Stäbchen, und in 5 die gewünschten Coccen. 
Will man von Spaltpilzen reines Aussaatmaterial gewinnen, die in thierischen 
oder pflanzlichen Organen vegetiren, so zerreibt man dieselben (z. B. durch den 
!) Die Anwärmungszeit nicht angerechnet. Die Erhitzung geschieht im Dampfkessel. Für 
viele Culturen genügt es übrigens, die Glasgefässe bei 120° ı Stunde im Trockenapparat oder 
auf dem Salzbade zu halten und dann die durch längere Zeit gekochte Nährlösung einzugiessen. 
?) KreBs, Archiv f. experimentelle Pathologie. Bd. I., pag. 46. 
3) NÄGELI, Untersuchungen über niedere Pilze, Ernährung der niederen Pilze durch Kohlen- 
stoff- und Stickstoffverbindungen, pag. 13. — BUCHNER ebenda; Ueber die experimentelle Er- 
zeugung des Milzbrandcontagiums, pag. 144. 
