miner le refroidissement de la rondelle D; alors, par le tube 

 opposé V, on envoie un peu de vapeur qui se répand dans 

 la cloche et se condense sur les parties froides de la boîte 

 et sur le disque D ; Topération doit être conduite avec len- 

 teur, de façon à déterminer le gonflement progressif et uni- 

 forme de la couche de gelée qui ne tarde pas ù récupérer 

 une hauteur presque égale à la hauteur que possédait la 

 couche de gelée fraîche. On laisse alors les micrgbes 

 incuber pendant une quinzaine de jours. 



Quand on juge les colonies suffisamment développées, 

 on sèche rapidement le disque puis on procède ensuite à 

 la coloration des taches microbiennes. 



A cet effet le disque est plongé quelques minutes dans 

 une solution d'alun, puis lavé dans de l'eau, et, au sortir 

 de ce bain, jeté dans une cuvette contenant une solution 

 d'acide sulfindigotique (solution de 2 gr. d'indigo pur dans 

 l'acide de Nordhausen, le tout étendu à 1.000 cmc). Au 

 contact de cette liqueur, le papier et les bactéries se 

 colorent promptement en bleu; on pousse au noir la teinte 

 des colonies qui se détachent très visiblement sur la 

 teinte moins foncée acquise par la gelée. 



Pour remplacer le fond l)leu clair de la gelée par le fond 

 jaune léger du papier nutritif : au sortir de la solution d'in- 

 digo, on lave le papier dans de l'eau et on le plonge dans 

 un bain de permanganate de potasse à 1 p. 1.000; la gelée 

 bleu clair passe au violet, puis au rose ; on lave une 3"^ fois 

 à l'eau pure, et l'opération est terminée. Il importe de 

 surveiller attentivement la décoloration par le permanga- 

 nate de potasse, dont l'action trop prolongée affaiblirait la 

 teinte des colonies. Pour arrêter instantanément l'action 

 de cette dernière substance, on peut au besoin tremper le 

 disque dans une solution de 3 ou 4 p. 100 d'acide oxalique. 

 Ce procédé de coloration est donc basé sur la plus grande 

 afïînité de l'indigo pour les microphytes que pour la gelée 

 de lichen. Les mycéliums des mucédinées, les bactéries 

 vulgaires, se colorent fort bien dans l'espace d'une mi- 

 nute, mais il existe plusieurs espèces chromogènes sur 

 lesquelles l'indigo n'a pas d'action, certaines colonies 

 rouges et jaunes conservent leur couleur propre, cela 

 n'offre aucun inconvénient, puisque le but de l'opération 



