Nr. 46. 



Naturwissenschaftliche Wochenschrift. 



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Princip der fractionirten Fällung-. Als besonders brauchbar 

 hatte sich das Jlagnesiunisulfat erwiesen. Die Antitoxine 

 waren zum grössten Theil in den Niederschlag' über- 

 gegangen, das stark eivveisshaltige Filtrat enthielt nur 

 unbedeutende Reste. Der Niederschlag wurde in Wasser 

 gelöst, in strömendem Wasser dialjsirt, filtrirt und ein- 

 gedampft. Das Ansteigen des Schutzvverthes der Milch hatte 

 auch eine Erhöhung des Inimunitätswertlies des daraus her- 

 gestellten Präparates zur Folge. Bei der Concentration 

 der Diphtherie- Antitoxine hat Wassermann ein ver- 

 ändertes Verfahren angegeben, doch scheint ein für die 

 Praxis brauchbares Präparat bis jetzt nicht erhalten 

 zu sein. 



Schon bei den Immunisirungsversuchen der Meer- 

 schweinchen haben wir gesehen, dass der Grad der 

 Immunität wuchs mit der Zutuhrung weiterer Dosen von 

 Diphtlieriegift. Die Immunität war „hochgetrieben", 

 wie der allgemein angenommene Ausdruck dafür ist. 

 Von dem geringeren oder höheren Grad der Immunität 

 hing auch wieder der geringere oder höhere Werth des 

 gewonnenen Heilserums ab. 



Den Grad der bei den Thieren erzielten Immu- 

 nität zahlenmässig auszudrücken, war für das gegen- 

 seitige Verständniss schon früh wUnschenswerth gewesen 

 und es ist das Verdienst Ehrlich 's, diese Art der Be- 

 stimmung bei der gegen giftige Pflanzeneiweise er- 

 worbenen hnmunität zuerst angewendet zu haben*!. 

 Behring wählte hiernach für die Diphtherieimmunität 

 folgende Bezeichnungen. Er ging von derjenigen Jlinimal- 

 dosis einer lebenden Diphtherie cultur aus, welche bei 

 subcutaner Injection ein Meerschweinchen nach 4 bis 

 5 Tagen sicher tödtet. Nimmt man diese Menge gleich 1, 

 so zeigt das Vielfache desselben, welches von einem Thier 

 ohne jeden localen oder allgemeinen Schaden ertragen 

 wird, den Immunitätsgrad an. Die sicher tödtliciie Mini- 

 maldosis einer Cultur, welche Behring und Wernicke im 

 Sommer 1891 lange Zeit benutzten, war 0,025 ccm. 

 Uebersteht ein Meerschweinchen die Infection mit 0,1 ccm, 

 so hat es eine Immunität gleich 4. In gleicher Weise 

 wuiile die Immunität gegen das direct eingefüln-te 

 Diphtherie g i f t ausgedrückt. 



Die angegebenen Zahlen sind, wie leicht einzusehen, 

 für verschiedene Culturcn, und somit auch für das ge- 

 wonnene Gift, keine absolut feststehenden, da leider das 

 Arbeiten mit lebenden Culturen mancherlei uncontrollir- 

 bare Zufälligkeiten in sich schliesst wie, z. B. Ver- 

 schiedenheiten der Temperatur und atmosphärische Ein- 

 flüsse. 



Ein Diphtheriegift, in Bouillon gelöst, behält aber 

 glücklicherweise seinen Wirkungswerth über Jahr und 

 Tag, wenn die Lösung mit 1 7o Carbolsäuregehalt vor 

 Licht geschützt, liei Zimmertemperatur in geschlossener 

 Flasche aufbewahrt wird. 



Die von dem Innnunitätsgrad der Thiere unmittelbar 

 alihängige immunisirende Kraft des gewonnenen Serums 

 wird ebenfalls durch Zahlen bestimmt. Behring hatte 

 hierzu früher beim Tetanus eine Methode benutzt, die 

 darin bestand, die Kraft des Serums nach derjenigen 

 Menge desselben zu beurtheilen, welche notliwendig ist, 

 um ein Thier von bestimmtem Gewicht gegen die sicher 

 tödtliche Minimaldosis des Giftes zu schützen. Wurde 

 z. B. eine Maus von 20 Gramm durch 0,01 Serum gegen 

 die Minimaldosis Gift geschützt, so entsprach der Werth 

 des Serum 0,01 : 20 oder 1 : 2000. 



Ehrlich war auf andere Weise zu dem gleichen 

 Resultat gekommen. Seit einiger Zeit sind beide Autoren 

 übereingekommen**) die Wertlibestimmung des Diph- 



*\ Behiing, Gos. Abhdlgn. II. S. 13 ff. 

 **) Wassermann, Real, l^ncylop. il. gos. Heilk. 2ü. Baml. S. 328. 



t herieheilserums nach einer neueren von Ehrlich her- 

 rührenden Methode vorzunehmen, welche grosse Sicherheit 

 gewährt. Sie beruht auf der schon erwähnten, von Behring 

 aufgefundenen Thatsache, dass Gift und Gegengift, ausser- 

 halb des thierischen Körpers gemischt, sich gegenseitig 

 sofort neutralisiren und zwar nach einfachen Gesetzen der 

 Proportionalität. Dieselbe gestattet natürlich auch während 

 der Inmuuiisirungsperiode den Inmninitätsgrad des Heil- 

 serums genau zu messen, was für die Praxis besonders 

 wichtig ist. 



Da das Diphtheriegift im Allgemeinen von wechseln- 

 der Stärke ist, so ist es zunächst uothwendig, sich ein 

 auf seineu Werth genau geprüftes Gift stets vorräthig 

 zu halten. Gewonnen wird dasselbe nach Behring*) aus 

 Bouillonculturen , welche lange Zeit gewachsen sein 

 müssen, um nennenswerthe Ausbeute zu erzielen. Das 

 Maximum der Giftansammlung wird nach 2 — 4 Monaten 

 erreicht, während es bei dem Tetauusgift schon nach 

 8 Tagen der Fall ist. Dann werden die Bacillen ab- 

 getödtet durch Zusatz von Carbolsäure bis zu einem Ge- 

 halt von 1V,„ während die in der Bouillon gelösten Gift- 

 stofte unverändert bleil)en. Die Cultur bleibt stehen, bis 

 die obersten Schichten der Flüssigkeit klar geworden 

 sind, dann giesst man ab und prüft das Abgegossene auf 

 seinen Giftgehalt an empfänglichen Thieren. Behring 

 benutzt dazu Meerschweinchen , weil die individuelle 

 Empfänglichkeit bei Kaninchen, welche gegen das Diph- 

 theriegift eigentlich noch empfindlicher sind, zu sehr 

 wechselt. Behufs der quantitativen Bestimmung wird nun 

 ein „Diphtherienormalgift-- benutzt, dessen Giftgehalt 

 durch eine Art Titrirungsmethode bestimmt ist. Zum 

 Ausgang der Titrirung ist eine Normalantitoxin - 

 lösung genommen, von welcher 0,1 ccm die Fähig- 

 keit hat, die zehnfache für Meerschweinchen 

 tödtliche Minimaldosis von Diphtheriegift für 

 diese Thiere gänzlich unschädlich zu machen, 

 wenn das Gift mit der Antitoxinlösung im Re- 

 agenzglase gemischt wird.**) Diese Mischung, einem 

 kleinen Meerschweinchen subcutan eingespritzt, wird re- 

 aetionslos resorbirt. Wird auch nur der fünfte Theil von 

 der Antitoxinlösung weniger genounnen, so bekommen die 

 Thiere schon starkes locales Infiltrat, und zeigen durch 

 Gewichtsabnahme eine Allgcmeinerkrankung an. In der 

 Praxis geht mau in der Weise vor, dass man mit einer 

 Pincettc in melirere Fläschchen je 1 ccm des Normal- 

 giftes thut und dazu das auf den Wirkungswerth zu 

 prüfende Serum in abgestufter Dosis, z. B. 0,4 — 0,3 — 

 0,2 — 0,1 — 0,05 ccm. Die umgeschüttelte Mischung 

 w'ird, eventuell nach Zusatz bis auf 4 ccm physiologisclier 

 Kochsalzlösung, sofort Meerschweinchen von 200—300 g 

 Körpergewicht eingespritzt, für welche das in der Mischung 

 enthaltene Diphtheriegift mindestens das zehnfache der 

 t(idtlieiien Minimaldosis darstellt. Zwei Tage nach der 

 Einspritzung lässt sich ein sicheres Urtheil abgeben. 

 Bleiben die Thiere mit den 0,4—0,1 ccm Serum völlig 

 gesund, während das Thier mit 0,05 erkrankt oder stirbt, 

 so würde die Lösung mit 0,1 Serum der einfachen Normal- 

 antitoxinlösuug entsprechen, da ja davon die zehnfach 

 tödtliche Minimaldosis des Diphtheriegiftes neutralisirt 

 ist. AVürde die gleiche Wirkung erst durch den Zusatz 

 von 1 ccm des zu prüfenden Serums erzielt, so hätte 

 man eine Vio Normaliösung, mit 0,01 ccm eine zehnfache. 

 Ehrlich und Wassermann berichteten schon im Frühjahr 



*) Beliving, B('klun[)funs der Infectionskranklieiten. ISM. 

 R 17-2. 



**) Man sagt aiioli, ilass den Werth von einfacher Normal- 

 antito.vin oder einer Iinmunisirungseinhcit das Serum besitzt, von 

 dem 0,1 genügt, um 1 cem Behring's Normalgift zu neutralisiren. 

 Ehrlich, Kossei u. Wassermann, lieber Gewinnun«- und Verwen- 

 dung des D. H. S. Deutsche med. Wochenschr. 18y-l, Nr. Iti. 



