Nr. 44. Naturwissenschaftliche Wochenschrift. 447 
hatte. Besonders empfindlich scheint die wässrige Lö- | in Alkohol nicht vollständig unlöslich. SO procentiger 
sung gegen das Eindampfen zu sein; sie. leidet dabei 
aber weniger, so lange noch genügend Flüssigkeit vor- 
handen ist, als gegen Ende des Eindampfens, wenn die 
Lösung sehr eoncentrirt wird; es scheiden sich dann ge- 
rinnselartige Flocken aus, welche auf Wasserzusatz sich 
nicht wieder lösen. Eine Probe des Niederschlags, 
welche auf dem Wasserbade wiederholt zur Trockne ein- 
gedampft und gelöst wurde, hatte schliesslich ihre Wir- 
kung vollkommen verloren. Auch durch längeres Stehen 
und durch schärferes Trocknen bei höherer Temperatur 
wird das gereinigte Tubereulin theilweise unlöslich. An- 
fangs nahm ich an, dass die unlöslichen Bestandtheile 
dem Tubereulin beigemengte fremde Substanzen seien, 
welehe man durch vorsichtiges trockenes Erhitzen, durch 
Behandeln mit heissem Dampf u. s. w. ausscheiden könne. 
Auch dann noch, als sich herausstellte, dass die unlöslich 
gewordenen Stoffe (wenn sie nicht durch wiederholtes 
Erhitzen verändert waren), dieselbe Wirkung wie das 
Tubereulin selbst hatten, liess sich immer noch anneh- 
men, dass es sich um coagulirte Eiweisskörper handelte, 
welche den wirksamen Stoff mit niedergerissen haben 
konnten. Da es aber weder gelang, durch andere Eiweiss- 
stoffe, welche der wässrigen Tubereulinlösung zugesetzt 
und zur Coagulation gebracht wurden, noch durch andere 
zu diesem Zweck in der Lösung bewerkstelligte Nieder- 
schläge das wirksame Prineip auszufällen, so musste diese 
Auffassung wieder aufgegeben werden, und ich möchte 
vorläufig die fragliche Substanz, da sie die gleiche Wir- 
kung wie das Tubereulin hat, als eine in Wasser unlös- 
liche Modification des Tubereulins ansehen. 
Wenn das gereinigte Tubereulin nicht sehr sorgfältig 
hergestellt und aufbewahrt wird, enthält es immer eine 
geringe Menge dieser unlöslichen Substanz, und man er- 
hält keine ganz klare Flüssigkeit beim Auflösen. Der 
Zusatz einer geringen Menge von Natriumcarbonat bis 
zur deutlich alkalischen Reaction genügt dann aber in 
der Regel, um alles in Lösung zu bringen. 
Lösungen des reinen Tubereulins in Glycerin 50%, 
sind dagegen sehr haltbar. Eine von mir seit vier Mo- 
naten aufbewahrte Lösung hat sich bis jetzt unverändert 
wirksam gehalten. Wenn die Lösungen einen Glycerin- 
gehalt von einigen Procent haben, kann man sie auch 
wiederholt eindampfen und wieder lösen, ohne dass sie 
dadurch geschädigt werden. Selbst sehr hohe Tempera- 
turen verträgt das Tubereulin, wenn die Lösung des- 
selben stark glycerinhaltig ist. So wurden mehrere Pro- 
ben im Autoklaven stundenlang auf 130°, selbst bis zu 
160° erhitzt, ohne dass ihre Wirkungsfähigkeit merklich 
dadurch herabgesetzt wurde*). Das Glycerin spielt somit 
für das Tubereulin eine sehr wichtige Rolle als conser- 
virendes Mittel. 
Fertigt man eine concentrirte Lösung des mög- 
lichst sorgfältig gereinigten Tuberculins an und giesst 
davon einige Cubikeentimeter in absoluten Alkohol, dann 
entsteht nicht, wie man erwarten sollte, sofort ein 
Niederschlag, sondern nur eine ganz schwache Opa- 
leseenz. Der Alkohol kann dann Wochen lang stehen, 
ohne dass sich dieses Aussehen ändert, und ein Nieder- 
schlag sich absetzt. Das gereinigte Tubereulin ist also 
*) In einem von Professor Pfuhl angestellten derartigen 
Versuche wurden zu gleicher Zeit Proben: 1. von Rohtubereulin, 
2. von wässeriger Lösung und 3. von 50°, glyeerinhaltiger Lö- 
sung des gereinigten Tubereulins 2 Stunden lang im Autoklaven 
einer Temperatur von 160° ausgesetzt, und dann entsprechende 
Mengen davon tubereulösen Thieren injieirt. Nur das Thier, 
welches die wässerige Lösung erhalten hatte, blieb am Leben; 
die beiden anderen mit Rohtubereulin und glycerinhaltiger Lö- 
sung des gereinigten Tubereulins injieirten starben und zeigten 
ausgesprochene Tubereulinwirkung. 
Alkohol kann schon ziemlich viel davon aufnehmen, 
60 °/,iger Alkohol beträchtliche Mengen. Wie kommt es 
nun aber, dass das Tuberkulin aus der ungereinigten 
Flüssigkeit durch Alkohol gefällt werden kann? Dieses 
Räthsel liess sich leicht dadurch lösen, dass dem tuber- 
kulinhaltigen Alkohol der Reihe nach die Bestandtheile 
der ungereinigten Flüssigkeit zugesetzt wurden. Der 
Glycerinzusatz liess keinen Niederschlag entstehen. Die 
Extractivstoffe bildeten an und für sich einen Nieder- 
schlag; aber nachdem dieser sich abgesetzt hatte, hatte 
der Alkohol noch sein opaleseirendes Aussehen. Erst 
wenn die Salze hinzugefügt wurden, ballte sich das 
Tuberkulin zu Flocken und wurde vollständig als Nieder- 
schlag abgeschieden. Von den Salzen erwies sich vor- 
zugsweise das Natriumchlorid als ein geeignetes Fällungs- 
mittel für Tuberkulin in Alkohol. Schon ein Tropfen 
einer konzentrirten Natriumchloridlösung genügt, um in 
mehreren hundert Cubikeentimetern Alkohol das Tuber- 
kulin zum Ausfallen zu bringen. Dieses Verhalten des 
Tuberkulins gegen verdünnten Alkohol ist bei der Rein- 
darstellung wohl zu berücksichtigen. Sobald nämlich 
durch mehrmaliges Spülen mit 60 °/,igem Alkohol die- 
jenigen Mineralsalze, welche die Fällung des Tuberkulins 
begünstigen, entfernt sind, fängt bei weiterem Spülen mit 
verdünntem Alkohol letzterer an zu opaleseiren, d. h. er 
beginnt das Tuberkulin zu lösen, und man kann auf 
solche Weise bedeutende Mengen Niederschläge verlieren. 
Tritt diese Erscheinung ein, dann muss der Alkohol durch 
Zusatz von Natriumehlorid geklärt, und zur weiteren 
Spülung absoluter Alkohol verwendet werden. 
‘Von den ehemischen Reactionen, welche zur Cha- 
rakterisirung des gereinigten Tuberkulins dienen können, 
seien folgende erwähnt. 
Zunächst giebt es alle Eiweissreactionen; so die 
Biuratreaktion, die Adamkie wiez’sche Reaction (Eisssig 
und eoncentrirte Schwefelsäure); mit dem Millon’schen 
Reagens entsteht ein weisser Niederschlag, der beim Er- 
wärmen röthlich wird u. $. w. 
Phosphorwolframsäure, Eisenacetat, Ammoniumsulfat, 
Gerbsäure fällen das Tuberkulin aus seiner Lösung voll- 
ständig aus. 
Bleiacetat bewirkt eine starke Trübung, aber keine 
vollständige Fällung. 
Auch die Essigsäure ruft in der wässrigen Lösung 
des gereinigten Tuberkulins anfangs starke Trübung und 
selbst geringen Niederschlag hervor, weleher aber auf 
weiteren Zusatz wieder verschwindet. Die durch Essig- 
säure abgeschiedene Substanz zeigte bei der Prüfung 
weder eine geringere, noch eine höhere Wirksamkeit wie 
das reine Tuberkulin und scheint der in Wasser unlös- 
liehen Modifikation ähnlich, vielleicht damit identisch 
zu sein. 
Wässrige Pikrinsäurelösung bewirkt einen flockigen 
Niederschlag, der sich beim Erwärmen auflöst und beim 
Erkalten der Flüssigkeit wieder erscheint. 
Verdünnte Salzsäure und Sehwefelsäure lassen keinen 
Niederschlag entstehen. Ebenso verhalten sich diese Säuren 
in stärkerer Concentration. 
Salpetersäure bewirkt dagegen einen Niederschlag, 
der beim Stehen zunimmt, beim Kochen eine gelbe Lösung 
giebt und auf Zusatz von Natronlauge braunroth wird 
(Xanthoproteinsäurereaction). 
Aschenanalysen und Elementaranalysen des gereinigten 
Tuberkulins sind von den Herren Proskauer und Brieger 
ausgeführt und haben ergeben: 
1. Aschenanalysen: 
I. Asche von 0,4816 g Substanz (bei 100° getrocknet) 
0,0802 — 16,65%, (Brieger). 
