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Prove tli isolani euto del bacterio. 



Credo utile di premettere una sommaria descrizione del procedi- 

 mento tecnico da me seguito per l' isolamento e per la inoculazione 

 dei bacterì. 



a) Isolamento. — Scelte le piante più vigorose e lavate le radici 

 in corrente d'acqua, si sceglievano i tubercoli e si distaccavano in- 

 sieme ad un certo tratto di radice. Si sottoponevano di nuovo a cor- 

 rente d'acqua, lavando la superficie con un pennello per allontanare 

 le particelle terrose, e dopo averli distesi su carta bibula, si distac- 

 cavano dalla radice tagliandoli alla base. I tubercoli stessi venivano 

 poi ripartiti in un certo numero di provette ed ivi lavati con acqua 

 sterilizzata, agitando per circa mezz'ora, e rinnovando per 20-30 volte 

 l'acqua. Dopo di che nelle provette stesse veniva versata rapida- 

 mente una soluzione di acido fenico al 5 V^ agitando per 2-3 secondi, 

 e poi sostituendo e rinnovando l'acqua per 8-10 volte. Infine si ver- 

 savano tutti i tubercoli ra])idamente in una capsula di vetro con 

 coperchio, sterilizzata in stufa a secco, ed ivi ridotti a poltiglia 

 con bacchetta di vetro previamente arroventata : il liquido torbido 

 serviva per l'inoculazione. Talvolta, invece di ridurre in poltiglia i 

 tubercoli, si portavano in una capsula di vetro sterilizzata col calore, 

 ed ivi sezionati con un bisturi precedentemente arroventato : coll'ago 

 di platino si asportava dal centro del tubercolo una certa quantità 

 di materiale che si portava in una provetta contenente un po' d'acqua 

 sterilizzata^ e ripetendo l'operazione finche, agitando la provetta, non 

 si ottenesse un visibile intorbidamento del liquido. 



b) Inoculazione. — I semi venivano prima immersi in una solu- 

 zione di sublimato corrosivo all' 1 Voo P®^* ^ minuti, e poi lavati molte 

 volte inacqua sterilizzata. Dopo averli fatti rigonfiare in acqua per 

 10-12 ore, venivano di nuovo lavati con acqua sterilizzata e collocati 

 su capsule di vetro nel cui fondo erano distesi alcuni fogli di carta 

 bibula, il tutto sterilizzato a secco. Contemporaneamente si prepa- 

 ravano colture di bacterì o su piastre di gelatina nutritiva o su mezzi 

 liquidi. Quando le radichette erano fuoruscite dai semi per 5-15 mm. 

 i semi stessi venivano gettati o sulle piastre di gelatina fluidificata 

 a 25° o sui recipienti con substrati liquidi, lasciandoveli per alcuni 

 minuti. Indi venivano seminati sui vasi, versandovi poi sopra il ma- 

 teriale bacterifero. I vasi di coltura, lavati accuratamente in acqua 

 corrente, venivano sterilizzati mantenendoli per 6-7 ore in stufa di 

 Koch. La sabbia adoperata era stata precedentemente sottoposta al- 

 l'arroventamento j)er circa 24 ore. 



