7 J. Keutner, Über das Vorkommen und die Verbreitung stickstoffbindender Bakterien im Meere. 33 
Salpeterstickstoff vorhanden war. Bei sämtlichen Versuchen wurde eine Anzahl Parallellösungen hergestellt, 
sterilisiert, mit derselben Menge Impfmaterial beimpit, hierauf die eine Hälfte der Kulturgefäße an drei 
aufeinander folgenden Tagen abermals sterilisiert, schließlich nach beendeter Versuchsdauer der Inhalt 
sämtlicher Kolben analysiert. Durch Abziehen des in dem sterilen Kolben gefundenen Stickstoffgehaltes 
von dem des geimpiten, ergab sich die durch Bakterientätigkeit gebundene Menge Stickstoff. Zur Bestimmung 
der letzteren wurden sämtliche Kulturgefäße einer Reihe mit gleichen Mengen, meist 10 ccm Kjeldahl’scher 
Schwefelsäure versetzt und unter Nachspülen mit 100 ccm destilliertem Wasser in geräumige Kolben aus 
Jenenser Glas gebracht. Die Zersetzung geschah in üblicher Weise in schräg stehenden Kolben. Nach 
dem Hinzufügen von 0,7 g Quecksilber als Kontaktsubstanz und einigen Tonstückchen, welch letztere den 
Zweck hatten, ein zu starkes Aufstoßen der Flüssigkeit und Zerspringen des Kolbens zu verhindern, wurde 
mit ganz schwacher, allmählich immer stärker werdender Flamme erhitzt. Nach Verlauf von etwa einer 
Stunde konnte man an der Schwarzfärbung des Zuckers, welcher nach und nach in Schäumung geriet, 
beobachten, daß das Wasser verdunstet war und nun die Wirkung der konz. Schwefelsäure einsetzte. Von 
diesem Zeitpunkte an ist es unerläßlich, die breiige Masse unter öfterem Umschwenken in Bewegung zu 
halten, da es sonst leicht geschieht, daß ein Teil durch das Schäumen an die obere Wandung des Kolbens, 
also außer den Wirkungskreis der Schwefelsäure gebracht wird und dort so fest anbackt, daß er später 
durch die Säure nicht mehr zersetzt werden kann. Sobald die Flüssigkeit vollständig farblos geworden 
ist, erhitzt man noch eine Viertelstunde. Nun erst ist die Zersetzung als beendet anzusehen. Zur Über- 
führung der erstarrten weißen Masse in den zur Destillation bestimmten, ebenfalls aus Jenenser Glas 
bestehenden Literkolben werden 300 ccm destilliertes Wasser verwandt. Der Destillationskolben wird 
alsdann mit einem doppelt durchbohrten Kautschuckstopfen geschlossen. Die eine Durchlochung trägt ein 
bis auf den Boden des Kolbens reichendes, nach oben hin sich in eine Kugel erweiterndes, durch einen 
Glashahn verschließbares Rohr, während die andere eine Stutzer’sche Kugeldestillationsröhre trägt. Zur 
Aufnahme der vorgelegten 2 Schwefelsäure benutzte ich einen möglichst hohen Erlenmeyerkolben, der in 
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schräger Lage befestigt wurde, um das Herausspritzen von Flüssigkeit während der Destillation zu ver- 
hüten. Die Austreibung des Ammoniaks erfolgt durch 50 ccm Natronlauge (1:1). Man führt dieselbe 
mittelst des oben erwähnten erweiterten Kugel-Rohres unter Umschwenken in die saure Flüssigkeit ein 
und läßt schließlich 8 ccm einer Schwefelkaliumlösung (1: 10) zufließen. Hierauf wird ohne Kühlung destilliert 
und durch immer stärkeres Erhitzen die Temperatur so gesteigert, daß die Dämpfe durch die Säure der 
Vorlage streichen, die Flüssigkeit zum Sieden bringen und dieselbe dadurch von der vorhandenen Kohlen- 
säure befreien. Nach dreiviertelstündigem Erhitzen wird der Erlenmeyerkolben abgenommen, die eintauchende 
Röhre mit destilliertem Wasser abgespült und der Säureüberschuß nach völligem Erkalten mit 50 Natronlauge 
festgestellt. Als Indikator benutzte ich einige Tropfen einer Lösung von Lackmoid und Malachitgrün ; 
titriert wurde mit Glashahnbüretten, welche an der hinteren Wand einen blauen Längsstreifen trugen, um 
so ein genaueres Ablesen zu erleichtern. Bei dem Einstellen der Normallösung ging ich von der Oxal- 
säure aus und bestimmte zum Titrieren einer jeden Versuchsreihe jedesmal den Faktor der Natronlauge 
und Schwefelsäure. Auch wurde die Reinheit der Reagentien, welche sämtlich von Kahlbaum bezogen 
waren, durch Blankobestimmungen festgestellt. Die Genauigkeit, mit welcher der Apparat arbeitete, zeigten 
Bestimmungen von Ammoniumchlorid und Natriumnitrat, bei welchen Salzen der Stickstoffgehalt genau 
gefunden werden konnte. Schließlich ist noch zu bemerken, daß ich das zur Analyse notwendige Wasser 
stets kurz vorher überdestillierte und die zuerst übergehenden Partien verwarf. 
Durchschnittlich fand ich bei Blankobestimmungen 0,3 mg Stickstoff in 100 ccm Ostseewasser mit 
den üblichen Nährstoffen. War 0,5 g Erde als Impfmaterial verwandt, so konnte der anfängliche Stickstoff- 
gehalt auf etwa 1Ya mg pro 100 ccm Nährlösung steigen, woraus zu folgern ist, daß ein erheblicherer 
Gehalt an Stickstoff auf die Tätigkeit von Stickstoffbakterien zurückzuführen war. Um diesen Schluß ganz 
sicher zu stellen, impfte ich eine Kultur mit Penicillium crustaceum, d. h. einem Organismus, der freien 
Stickstoff nicht bindet. Tatsächlich fand ich, daß nach beendeter Kulturdauer der Stickstoffgehalt des 
geimpften Kolbens, in dem der Pilz nur kümmerlich gewachsen war, den eines sterilen Parallelkolbens 
nicht übertraf, daß andererseits ein dritter Kolben, der mit Azofobacter beimpit worden war, ca. 5 mg 
Wissensch. Meeresuntersuchungen. K. Kommission Kiel. Bd. 8. b) 
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